题目内容

【题目】24-D是一类广泛应用于单子叶作物田间的除草剂,其大量施用导致土壤污染。某研究小组欲从24-D污染土壤样品中筛选24-D降解菌株,采集土样后进行如图操作:

富集培养1组培养液成分:基础无机盐培养液+葡萄糖+24-D

富集培养2组培养液成分:基础无机盐培养液+24-D

基础无机盐培养液成分:MgSO4、(NH42SO4FeS4KH2PO4Na2HPO4

回答下列问题。

1)微生物实验要严格防止杂菌污染,划线纯化时对接种环可采用________灭菌。

2)在特定环境中只让一种来自同一祖先的微生物群体生存的技术叫作纯化。纯化接种的方法有________和平板划线法。纯化培养时,需在基础无机盐培养液中添加以24-D为唯一碳源,还要添加_______

3)富集培养目的是_____,富集培养________(填“1”或“2”)组菌落数多,判断依据是______

4)欲检测所获得的不同菌株对24-D降解能力大小,可将目的菌分别接种在相同浓度的24-D培养液中,培养一段时间后,检测_____,评估其降解能力。

【答案】灼烧 稀释涂布平板法 琼脂 增加目的菌(24-D降解菌)的浓度 1 2组只有能利用24-D作碳源的微生物可以繁殖,而1组能利用葡萄糖和24-D作碳源的微生物均可繁殖 24-D剩余量(或24-D降解率、24-D的降解产物)

【解析】

从微生物的混合物中筛选目的微生物需要使用选择培养基,选择培养基是指根据某种微生物的特殊营养需求或其对某种化学、物理因素的抗性不同而制备的培养基,能提供有利于目的菌株生长的条件,同时抑制或阻止其他微生物生长。本实验欲从24-D污染土壤样品中筛选24-D降解菌株,因此需要利用以24-D为唯一碳源的选择培养基。实验室常用的灭菌方法有干热灭菌、灼烧灭菌和高压蒸汽灭菌。

1)微生物实验要严格防止杂菌污染,划线纯化时每一次划线前都要对接种环采用灼烧灭菌。

2)微生物接种的方法很多,常用的纯化接种的方法有平板划线法和稀释涂布平板法。纯化培养时一般使用固体选择培养基,除在基础无机盐培养液中添加以24-D为唯一碳源外,还要添加凝固剂琼脂。

3)富集培养目的是增加目的菌(24-D降解菌)的浓度,以确保能从样品中分离所需微生物。比较两组培养基成分可知,差异在于富集培养1组中含有葡萄糖而2组没有,因此1组中能利用葡萄糖和24-D作碳源的微生物均可繁殖,而2组只有能利用24-D作碳源的微生物可以繁殖,则富集培养1组菌落数较多。

4)欲检测所获得的不同菌株对24-D的降解能力大小,可将目的菌分别接种在相同浓度的24-D培养液中,培养一段时间后,检测培养液中的24-D的剩余量,剩余量最低的菌株降解能力最强。

练习册系列答案
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【题目】萝卜的蛋白A具有广泛的抗植物病菌作用,而且对人体没有影响。我国科学家欲获得高效表达蛋白A的转基因大肠杆菌作为微生物农药,做了相关研究。

1)研究者用_________酶处理蛋白A基因和pET质粒,得到重组质粒,再将重组质粒置于感受态大肠杆菌细胞悬液中,获得转基因大肠杆菌。

2)检测发现,转入的蛋白A基因在大肠杆菌细胞中表达效率很低,研究者推测不同生物对密码子具有不同的偏好,因而设计了与蛋白A基因结合的两对引物(引物BC中都替换了一个碱基),并按图2方式依次进行4PCR扩增,以得到新的蛋白A基因。

①这是一种定点的_________技术。

②图2所示的4PCR应该分别如何选择图1中所示的引物?请填写以下表格(若选用该引物划“”,若不选用该引物则划“×”)_________

引物A

引物B

引物C

引物D

PCR1

PCR2

PCR3

PCR4

3)研究者进一步将含有新蛋白A基因的重组质粒、_________pET质粒分别导入大肠杆菌,提取培养液中的蛋白质,用_________方法检测并比较三组受体菌蛋白A的表达产物,判断新蛋白A基因表达效率是否提高。为检测表达产物的生物活性,研究者将上述各组表达产物加入到长满了植物病菌的培养基上,培养一段时间后,比较抑菌圈的大小,以确定表达产物的____________

4)作为微生物农药,使用时常喷洒蛋白A基因的发酵产物而不是转蛋白A基因的大肠杆菌,其优点是_________

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