题目内容
【题目】下图所示过程为科学家将人的生长激素基因与大肠杆菌的DNA分子进行重组，并成功地在大肠杆菌中得以表达。据图回答：
（1）图中过程(1)表示的是采取______的方法来获取目的基因。获得目的基因后，如果想快速提高其数量，可以采用______技术对相应的DNA片段进行扩增，该技术需要的酶是________，此酶的特点是__________。
（2）图中过程(2)是基因工程的第二步，即：________________________。
（3）图中过程(3)是用人工方法，使体外重组的DNA分子转移到受体细胞内，一般将受体大肠杆菌B用_________处理，使细胞处于能吸收外源DNA的生理状态，这种细胞称为_________细胞，再与溶于缓冲液的表达载体混合，在一定的温度下完成转化。
（4）检测大肠杆菌B是否导入了质粒或重组质粒，可采用的方法是将得到的大肠杆菌B涂布在一个含有氨苄青霉素的培养基上，能够生长的，说明已导入了质粒A或重组质粒，反之则没有导入，原因是普通质粒A和重组质粒上都有______________。
（5）如果把导入了普通质粒A或重组质粒的大肠杆菌，放在含有四环素的培养基上培养，出现的现象是有的能生长，有的不能生长,其中导入重组质粒的细菌______（能/不能）生长。
（6）应用___________________技术可检测工程菌是否表达出人的生长激素。
【答案】 逆转录 PCR技术 Taq酶（热稳定DNA聚合酶） 耐高温 构建基因表达载体 钙离子/CaCl2 感受态 抗氨苄青霉素基因 不能 抗原—抗体杂交
【解析】试题分析：本题结合能分泌生长激素的转基因大肠杆菌培育过程图，考查基因工程的相关知识，要求学生识记基因工程的过程及操作步骤，能根据限制酶识别序列选择合适的限制酶，并能准确判断图中各过程的名称，再结合所学的知识准确答题。图示表示将人的生长激素基因与大肠杆菌的DNA分子进行重组，并成功地在大肠杆菌中得以表达，其中（1）是表示通过人工合成法获取目的基因；（2）表示基因表达载体的构建过程，该过程需要限制酶和DNA连接酶；（3）表示将目的基因导入受体细胞。
（1）表示采用逆转录法（人工合成法）获取目的基因，即以mRNA为模板逆转录形成单链DNA，再进一步合成DNA双链。PCR技术是将某一DNA分子片段在实验条件下，合成许多相同的DNA片段的一种方法，利用这种技术能快速而特异性的扩增任何要求的目的基因或DNA分子片段，该技术需要的酶是Taq酶（热稳定DNA聚合酶），此酶具有耐高温的特点。
（2）据图可知，图中过程（2）是基因工程的第二步，即构建基因表达载体。
（3）图中（3）过程用人工方法，使体外重组的DNA分子转移到受体细胞内，主要是借鉴细菌或病毒侵染细胞的途径。即一般将受体大肠杆菌B用CaCl2处理，以增大细胞壁的通透性，使细胞处于能吸收外源DNA的生理状态，这种细胞称为感受态细胞，再与溶于缓冲液的表达载体混合，在一定的温度下完成转化。
（4）由图可知，质粒上含有四环素抗性基因和氨苄青霉素的抗性基因。构建基因表达载体时，破环了质粒上的四环素抗性基因，但没有破环氨苄青霉素的抗性基因，所以导入普通质粒或重组质粒的大肠杆菌都能在含有氨苄青霉素的培养基上生长的原因是因为二者都含有抗氨苄青霉素基因。
（5）由第四小题分析可知，把已经导入了普通质粒或重组质粒的大肠杆菌，放在含有四环素的培养基上培养，导入普通质粒的大肠杆菌能生长，导入重组质粒的大肠杆菌不能生长，因为目的基因插入在四环素抗性基因中，破坏了其结构。
（6）应用抗原—抗体杂交技术可检测工程菌是否表达出人的生长激素。
