题目内容
【题目】SARS冠状病毒（SARS-CoV）的N蛋白是一种重要的结构蛋白，位于病毒颗粒的核心部分，并与病毒RNA结合。在病毒的包装等过程中起重要作用。因此制备抗SARS-CoVN蛋白的单克隆抗体（mAb），对于诊断和治疗疾病具有重要意义。用SARS-CoV制备单克隆抗体的流程如下图：
（1）为了获得大量的SARS冠状病毒N蛋白目的基因，可以采用PCR技术在体外扩增，该技术还需要dNTP、_______酶以及引物等，扩增三轮需要的引物数量为___________个。
（2）若双链DNA几乎具有等量的净电荷，且在高于等电点的pH溶液中带负电荷。利用琼脂糖凝胶电泳进行分离和纯化DNA分子主要依据_______不同，采用外加电场使其分开。在电泳槽中还需要加入______作为参照物进行鉴定。
（3）小鼠被抗原蛋白免疫后，可以从___________中获取细胞Ⅰ。细胞Ⅰ中可能包含多种能产生抗体的细胞，原因是______________________。
（4）为了分离出只能产生mAb的细胞Ⅱ，需要用___________技术对杂交瘤细胞进行筛选。目前可将图中的___________作为疫苗，预防SARS冠状病毒引发的疾病。
【答案】Taq（耐高温DNA聚合） 14 分子量（大小） 标准DNA 脾脏 小鼠曾经接触过其他抗原 抗体检测（抗原—抗体杂交） SARS冠状病毒的N蛋白
【解析】
由图可知，提取相关mRNA，通过逆转录过程可形成SARS冠状病毒（SARS-CoV）的N蛋白的目的基因，将该目的基因构建基因表达载体后导入人胚肺成纤维细胞，在该细胞中生产SARS冠状病毒（SARS-CoV）的N蛋白。将此蛋白注射到小鼠体内，可引起小鼠发生特异性免疫，产生能够分泌与SARS冠状病毒（SARS-CoV）的N蛋白结合的抗体的浆细胞，将此浆细胞与骨髓瘤细胞融合形成杂交瘤细胞，经过培养和筛选可获得能产生单一抗体的杂交瘤细胞，在体外培养该细胞，即可得到单克隆抗体（mAb）。
（1）PCR过程需要耐高温的DNA聚合酶，即Taq酶，第一次循环要1对引物，第二次要2对，第三次需要4对，扩增三轮总共需要7对也就是14个引物。
（2）由于双链DNA几乎具有等量的净电荷，且在高于等电点的pH溶液中带负电荷。所以利用琼脂糖凝胶电泳分离纯化DNA主要是依据不同DNA的分子量不同，在电泳槽中还需要加入标准DNA作为参照物。
（3）小鼠被抗原蛋白免疫后，从产生免疫反应的小鼠的脾脏中获取B淋巴细胞也就是细胞I。因为小鼠曾经接触过其他抗原，所以细胞I可能包含多种能产生抗体的细胞。
（4）为了分离出只能产生mAb的细胞II，可用抗原抗体杂交技术对杂交瘤细胞进行筛选，目前可以将图中的SARS冠状病毒的N蛋白作为疫苗，预防SARS冠状病毒引发的疾病。
