题目内容
【题目】应用生物工程技术可以获得人们需要的生物新品种或新产品。请回答下列有关生物工程的问题。
（1）基因工程中构建基因表达载体需要用到________酶和DNA连接酶，DNA连接酶中，__________可连接DNA的两个末端。
（2）大肠杆菌PUC19质粒如图所示。
Lacz基因是PUC19质粒上重要的标记基因，其表达产物能水解X-gal，进而使大肠杆菌菌落呈蓝色。用EcoRl构建重组质粒，导入受体菌（不含LacZ基因和氨卡青霉素抗体基因）并进行检测。下列叙述不正确的是_____（单选）
A.应用涂布法将受体菌群接种在培养基表面
B.培养基中应含有氨卡青霉素和X-gal
C.挑取菌落的接种环在操作前后都应该灼烧灭菌
D.应挑取培养基表面的蓝色菌落进行扩大培养
（3）植物转基因技术中，最常用的导入目的基因的方法是_____，其中需要的运载体是________，目的基因插入到该运载体的______中，以便使植物细胞得以转化。这是______植物和裸子植物常用的一种基因转化方法。
（4）动物基因工程中，一般把目的基因导入动物的______细胞中。
【答案】 限制性核酸内切酶 (限制酶） T4DNA连接酶 D 农杆菌转化法 Ti质粒 T-DNA 双子叶 受精卵
【解析】试题分析：基因工程的基本操作步骤主要包括四步：①目的基因的获取②基因表达载体的构建③将目的基因导入受体细胞④目的基因的检测与鉴定。DNA重组技术至少需要三种工具：限制性核酸内切酶（限制酶）、DNA连接酶、运载体。基因表达载体主要由目的基因、标记基因、启动子和终止子，其中标记基因的作用是为了鉴别受体细胞中是否含有目的基因，从而将含有目的基因的细胞筛选出来。
（1）在构建基因表达载体时要用到的工具酶有限制酶和DNA连接酶，T4DNA连接酶可连接DNA的两个末端。
（2）由题意可知，受体菌必须均匀分布在培养基中，应用涂布法将受体菌群接种在培养基表面，A正确；氨苄青霉素抗性基因属于标记基因，EcoRI的酶切位点位于LacZ基因上，因此培养基中应含有氨苄青霉素和X-gal，含有目的基因的大肠杆菌能在该培养基上生存，但不会出现蓝色，B正确；为了防止杂菌污染，以及目的菌污染环境，因此挑取菌落的接种环在操作前后都应该灼烧灭菌，C正确；由于含有目的基因的大肠杆菌上存在氨苄青霉素抗性基因，而LacZ基因被破坏，所以应挑取培养基表面的氨苄青霉素抗性基因的菌落进行扩大培养，D错误。
（3）植物转基因技术中，常用农杆菌转化法将目的基因导入受体细胞，其中需要的运载体是农杆菌的Ti质粒，目的基因插入到该运载体的T-DNA中，以便使植物细胞得以转化，这是双子叶植物和裸子植物常用的一种基因转化方法。
（4）动物基因工程中，一般把目的基因导入动物的受精卵细胞中。
