Question

【题目】编码蛋白甲的DNA序列（序列甲）由A，B，C，D，E五个片段组成，编码蛋白乙和丙的序列由序列甲的部分片段组成，如图1所示．

回答下列问题：
（1）现要通过基因工程的方法获得蛋白乙，若在启动子的下游直接接上编码蛋白乙的DNA序列（TTCGCTTCT…CAGGAAGGA），则所构建的表达载体转入宿主细胞后不能翻译出蛋白乙，原因是 ．
（2）某同学在用PCR技术获取DNA片段B或D的过程中，在PCR反应体系中加入了DNA聚合酶、引物等，还加入了序列甲作为 ， 加入了作为合成DNA的原料．
（3）现通过基因工程方法获得了甲、乙、丙三种蛋白，要鉴定这三种蛋白是否具有刺激T淋巴细胞增殖的作用，某同学做了如下实验：将一定量的含T淋巴细胞的培养液平均分成四组，其中三组分别加入等量的蛋白甲、乙、丙，另一组作为对照，培养并定期检测T淋巴细胞浓度，结果如图2．
①由图2可知，当细胞浓度达到a时，添加蛋白乙的培养液中T淋巴细胞浓度不再增加，此时若要使T淋巴细胞继续增殖，可采用的方法是 ． 细胞培养过程中，培养箱中通常要维持一定的CO2浓度，CO2的作用是 ．
②仅根据图、图2可知，上述甲、乙、丙三种蛋白中，若缺少（填“A”“B”“C”“D”或“E”）片段所编码的肽段，则会降低其刺激T淋巴细胞增殖的效果．

Answer 1

【答案】
（1）因为在启动子的下游接上的编码蛋白乙的DNA序列,不能启动
（2）模板DNA,4种脱氧核苷酸
（3）细胞培养（传代培养）,维持培养液中的pH,C
【解析】解：（1）因为在启动子的下游接上的编码蛋白乙的DNA序列，不能启动编码蛋白乙的DNA序列的转录，因此所构建的表达载体转入宿主细胞后不能翻译出蛋白乙．（2）PCR技术扩增目的基因的条件需要：模板DNA、四种脱氧核苷酸、一对引物、热稳定DNA聚合酶（Taq酶）．序列甲作为模板DNA，DNA的原料为4种脱氧核苷酸．（3）①动物细胞可以通过细胞培养（传代培养）继续增殖．细胞培养过程中，需要气体环境，其中气体CO2的作用是维持培养液中的pH．

②分析坐标图：对比甲和乙蛋白刺激T淋巴细胞增殖情况发现：最终效果相当，只是增殖时间不同，可以推断出A、E片段编码的肽段不会降低T淋巴细胞增殖效果．将丙蛋白分别与甲和乙蛋白刺激T淋巴细胞增殖情况比较发现：丙蛋白降低了T淋巴细胞增殖．丙基因与甲和乙基因相比较，缺少了一段C基因，也就是说若缺少C片段所编码的肽段，则会降低其刺激T淋巴细胞增殖的效果．

故答案为：（1）因为在启动子的下游接上的编码蛋白乙的DNA序列，不能启动（2）模板DNA 4种脱氧核苷酸（3）细胞培养（传代培养） 维持培养液中的pH（4）C

理清动物细胞培养的过程：