Question

【题目】为了解基因结构，通常选取一特定长度的线性DNA分子，先用一种限制酶切割，通过电泳技术将单酶水解片段分离，计算相对大小；然后再用另一种酶对单酶水解片段进行降解，分析片段大小。下表是某小组进行的相关实验。

已知第一线性DNA序列共有 5000bp （bp为碱基对）	第一步水解	产物 （单位bp）	第二步水解	产物 （单位bp）
	A酶切割	3500	将第一步水解产物分离后，分别用B酶切割	1500 2000
		1000		1000
		500		500
	B酶切割	2000	将第一步水解产物分离后，分别用A酶切割	500 1500
		3000		2000 1000
	经A酶和B酶同时切割	2000 1500 1000 500

（1）该实验中体现出限制酶的作用特点是 。

（2）由实验可知，在这段已知序列上，A酶与B酶的识别序列分别为 个和 个。

（3）根据表中数据，请在下图中用箭头标出相应限制酶的酶切位点。

（4）已知BamH I与BglⅡ的识别序列及切割位点如下图所示，用这两种酶和DNA连接酶对一段含有数个BamHI和BglⅡ识别序列的DNA分子进行反复的切割、连接操作，若干次循环后和 序列明显增多，该过程中DNA连接酶催化 键的形成。

Answer 1

【答案】

（1）一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列，且在特定的位点切割

（2）2 1

（3）

（4） 磷酸二酯键

【解析】

（1）该实验中体现出限制酶的作用特点是酶的专一性．

（2）A酶切割后形成3段，所以有2个识别位点，B酶切割后形成2段，所以有1个切割位点．

（3）由于酶B只有一个限制酶切位点，即在2000和3000之间，可以先标注出；又由于酶A又可以将2000的这段切成500和1500的，结合酶A单独切割又可以标注其切割位点，同理标出另一个切割位点，答案如下图：

（4）巳知BamHI与BglII的识别序列及切割位点如图2所示。用这两种酶和DNA连接酶对一段含有数个BamHⅠ和BglⅡ识别序列的DNA分子进行反复的切割、连接操作，若干循环后和序列明显增多。DNA连接酶催化形成的是磷酸二酯键。