题目内容
【题目】回答下列关于基因工程及微生物的问题
Ⅰ.图1是利用基因工程生产人胰岛素的主要流程图，图2是生产过程中所制备的带有目的基 因供体DNA分子及载体（质粒）的示意图。箭头所指为相应限制性核酸内切酶的识别位点，Tetr表示四环素抗性基因，基因C的表达产物会阻断Tetr基因的表达。请回答下列问题：
（1）图1中的供体细胞是_____。②过程称为_____，该过程需要的原料是_____。
（2）若图1所示过程中以Tetr为标记基因，则第③步中应选用对供体DNA和质粒进行切割；为检测转化结果，将经第④步处理后的细菌培养液接种到含有_____培养基上，长出的菌落就是成功插入目的基因的菌落。
（3）具体操作过程中图3所示的黏性末端是由 ____种限制性核酸内切酶作用产生的。
Ⅱ.将人胰岛素基因导入到细菌后，需要对细菌进行培养，不同的微生物其所需营养有所不同，表为培养某微生物的培养基。
牛肉膏 | 酵母膏 | 蛋白胨 | 蔗糖 | MgSO47H2O | 水 | 琼脂 | pH |
5g | 1g | 5g | 5g | 0.4g | 1L | 15g | 7.4 |
（4）据表2分析该微生物的同化作用类型为_____型。该培养基从物理形态上分应属于_____培养基。
（5）图4是采用两种接种方法接种某微生物后培养的效果图。则获得图A效果的接种方法是_____，图B效果的接种方法是_____。
【答案】人的胰岛B细胞 逆转录 4种脱氧核苷酸 Bgl I、HindⅢ四环素 2 异养 固体 稀释涂布法 平板划线法（或划线法）
【解析】
基因工程的基本操作程序：
1、目的基因的获取。
2、基因表达载体的构建:（1）目的：使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传至下一代，使目的基因能够表达和发挥作用。（2）组成：目的基因+启动子+终止子+标记基因。①启动子：是一段有特殊结构的DNA片段，位于基因的首端，是RNA聚合酶识别和结合的部位，能驱动基因转录出mRNA，最终获得所需的蛋白质。②终止子：也是一段有特殊结构的DNA片段，位于基因的尾端。③标记基因的作用：是为了鉴定受体细胞中是否含有目的基因，从而将含有目的基因的细胞筛选出来。常用的标记基因是抗生素基因。
3、将目的基因导入受体细胞。
4、目的基因的检测和表达。
一种限制酶能够识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断裂。
（1）由图解中“细菌发酵产生胰岛素”可以看出，图1中的供体细胞是人的胰岛B细胞。图1中第②步表示逆转录过程，该过程需要的原料是4种脱氧核苷酸。
（2）只有存在基因C的表达产物时Tetr基因才能表达，因此若图1所示过程中以Tetr为标记基因，则第③步中应选用SmaⅠ和PstⅠ对供体DNA和质粒进行切割，这样可以保证C基因的正常表达；标记基因是四环素抗性基因，所以在含有四环素的培养基上培养大肠杆菌。
（3）图3中第一个和第三个黏性末端是由一种限制酶切割形成的，第二个和第四个是由一种限制酶切割形成的。
（4）表中的配方中的碳源是蔗糖，所以培养的微生物的同化作用类型应该是异养型，配方中含有琼脂，所以该培养基从物理形态上分应属于固体培养基。
（5）据图分析，图A菌落均匀是稀释涂布平板法接种，图B是平板划线法接种。
