Question

【题目】（1）红细胞含有大量血红蛋白，红细胞的机能主要是由血红蛋白完成。我们可以选用猪、牛、羊等动物的血液进行实验，来提取和分离血红蛋白，请回答下列有关问题：

①实验前取新鲜的血液，要切记在采血容器中预先加入_______以防止血液凝固，取血回来，马上进行离心，收集血红蛋白溶液。此过程是样品处理，在获取红细胞内的血红蛋白时，较简便的办法是_________，然后再分离血红蛋白溶液。

②收集到的血红蛋白溶液在透析袋中透析，透析的目的是________。

③透析结束后，需将得到的样品通过 ____法进一步的纯化，最后可经 ____________凝胶电泳法进行纯度鉴定。

（2）在固定化酵母细胞时，通常采用 _________法，加热溶解海藻酸钠时需注意_______加热，溶化好的海藻酸钠溶液应冷却至室温后再与已活化的酵母细胞充分混合。

Answer 1

【答案】柠檬酸钠（或抗凝剂） 红细胞吸水涨破 去除相对分子质量较小的杂质 凝胶色谱 SDS—聚丙烯酰胺 包埋 小火（或间断）

【解析】

血红蛋白的提取与分离的实验步骤主要有：

（1）样品处理：①红细胞的洗涤，②血红蛋白的释放，③分离血红蛋白。
（2）粗分离：①分离血红蛋白溶液，②透析。
（3）纯化：调节缓冲液面→加入蛋白质样品→调节缓冲液面→洗脱→收集分装蛋白质。
（4）纯度鉴定--SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳。

（1）①采取血液时要在采血容器中预先加入柠檬酸钠以防止血液凝固。在获取红细胞内的血红蛋白时，较简便的办法是将红细胞置于蒸馏水中利用渗透原理使红细胞吸水涨破，然后再分离血红蛋白溶液。

②收集到的血红蛋白溶液在透析袋中透析，由于透析的原理是透析袋能使小分子自由进出，而大分子则保留在袋内，所以透析的目的是去除相对分子质量较小的杂质。

③样品的纯化是通过胶色谱法将相对分子质量大的杂质蛋白除去。最后可经SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳法进行纯度鉴定。

（2）酵母细胞个大，难以被吸附或结合，所以在固定化酵母细胞时，通常采用包埋法。加热溶解海藻酸钠时需注意小火（或间断）加热，溶化好的海藻酸钠溶液应冷却至室温后再与已活化的酵母细胞充分混合。