Question

【题目】荔枝、龙眼果实风味佳，而成熟荔枝极不耐保存。科研人员利用转基因技术和植物体细胞杂交技术对荔枝、龙眼的育种开展研究。请回答下列问题：

(1)荔枝愈伤组织分化的胚状体在培养时存在严重玻璃化、畸形胚多的现象，科研人员通常采用___________(填方法)导入外源hpt基因和gus基因，来获得稳定再生胚性愈伤组织(TPEC)。培养荔枝愈伤组织的培养基中除需要添加无机营养成分、有机背养成分外，还需要添加______________(答出两点即可)等。

(2)用__________技术可以检测TPEC细胞稳定表达的gus蛋白。选取部分细胞在一定溶液中用________(填酶的名称)处理后可以获得原生质体。

(3)用黄绿色的异硫氰酸荧光素标记荔枝TPEC细胞的原生质体，用红色的异硫氰酸碱性蕊香红标记龙眼细胞的原生质体。将两种原生质体按1：1的比例在电融仪中诱导融合，原生质体融合的原理是________________________________________。

(4)杂种细胞的筛选工作至关重要，荧光显微镜下筛选杂种细胞的方法是_______________。

Answer 1

【答案】农杆菌转化法 植物激素、琼脂 抗原一抗体杂交 纤维素酶和果胶酶 细胞膜具有一定的流动性 挑选能够产生黄绿色和红色两种荧光的原生质体，即杂种细胞

【解析】

1、诱导原生质体融合时可采用化学法和物理法，采用化学法诱导时，一般是用聚乙二醇（PEG）作为诱导剂，依据的原理是细胞膜的流动性和植物细胞的全能性。

2、农杆菌转化法（约80%的转基因植物都是用这种方法获得的）：

①农杆菌特点：易感染双子叶植物和裸子植物，对单子叶植物没有感染力；Ti质粒的T-DNA可转移至受体细胞，并整合到受体细胞的染色体上；

②转化：目的基因插人Ti质粒的T-DNA上进入农杆菌→导入植物细胞→目的基因整合到植物细胞染色体上→目的基因的遗传特性得以稳定维持和表达。

3、目的基因的检测和鉴定：

（1）分子水平上的检测

①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；

②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术；

③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术；

（2）个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等。

（1）将外源基因导人荔枝愈伤组织通常采用农杆菌转化法。培养荔枝愈伤组织的培养基中除了需要添加无机营养成分、有机营养成分外，还需要添加植物激素和琼脂等。

（2）gus蛋白的检测方法为抗原一抗体杂交技术。获得原生质体的方法是用纤维素酶和果胶酶处理荔枝的愈伤组织。

（3）原生质体融合的原理是细胞膜具有一定的流动性。

（4）由于荔枝原生质体用黄绿色的异硫瓿酸荧光素标记，龙眼原生质体用红色的异硫瓿酸碱性蕊香红标记，荧光显微镜下筛选杂种细胞的方法是挑选能够产生黄绿色和红色两种荧光的原生质体，即杂种细胞。