Question

【题目】异烟肼（isoniazid）又名雷米封（rimifon），是吡哆醇的结构类似物或代谢拮抗物。科研人员为了定向培育抗异烟肼的吡哆醇高产酵母菌突变株，采用梯度平板法进行了如下实验：

①在灭菌后的培养皿中加入10 mL融化的普通培养基，皿底斜放（一边垫起），待凝（如图1）；

②待培养基凝固后将培养皿放平，倒上第二层含适当浓度的异烟肼的培养基（10 mL），这样便得到异烟肼含量从一边到另一边逐渐升高的梯度平板（如图2）；

③用移液管移取经诱变处理后的酵母菌细胞悬液0．1 mL到梯度平板上，进行涂布；

④将平板倒置于22℃恒温培养箱中培养一段时间，可观察到梯度平板上酵母菌的生长情况（如图3）。

据分析回答：

（1）从作用来看，本研究使用的培养基属于________培养基，为了使其能够凝固，在配制时通常需要在培养基中加入________。

（2） 步骤①中培养基常用的灭菌方法是________，步骤③中移液管常用的灭菌方法是________。

（3）步骤③中，滴加到梯度平板上的酵母菌细胞悬液一般不超过0．1 mL的原因是________。

（4）步骤④中，培养基上接种后将平板进行倒置培养的目的是________，恒温培养箱的温度控制在22℃左右，其主要目的是________。

（5）根据实验结果推测，图3抗性菌落主要位于图2 中________端，其具有抗药性的主要原因是________。

Answer 1

【答案】选择 琼脂 高压蒸汽灭菌 干热灭菌 培养基表面的酵母菌细胞悬液会出现积液，导致菌体堆积，影响分离效果 防止冷凝后形成的水珠滴落在培养基上污染培养基 为酵母菌细胞的生长、繁殖提供适宜的温度 B 酵母菌合成更高浓度的吡哆醇，以克服异烟肼的竞争性抑制

【解析】

1、培养基按功能分：

种类	制备方法	特征	用途
选择培养基	培养基中加入某种化学成分	根据某种微生物的特殊营养要求或其对某化学、物理因素的抗性而设计的培养基使混合菌样中的劣势菌变成优势菌，从而提高该菌的筛选率	加入青霉素分离得到酵母菌和霉菌
鉴别培养基	加入某种试剂或化学药品	依据微生物产生的某种代谢产物与培养基中特定试剂或化学药品反应，产生明显的特征变化而设计	鉴别和区分菌落相似的微生物伊红和美蓝培养基可以鉴别大肠杆菌

2、无菌技术：

（1）关键：防止外来杂菌的入侵；

（2）具体操作

①对实验操作的空间、操作者的衣着和手进行清洁和消毒；

②将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等进行灭菌；

③为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在酒精灯火焰附近进行；

④实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品接触。

（1）该实验所用的培养基中含有药物，只有能抗药物的微生物才能在该培养基上生存，因此该培养基属于选择培养基；为了使培养基能够凝固，通常需要在培养基中加入凝固剂--琼脂。

（2）培养基常用的灭菌方法是高压蒸汽灭菌，移液管常用的灭菌方法是干热灭菌。

（3）滴加到梯度平板上的酵母菌细胞悬液一般不超过0.1mL的原因是培养基表面的酵母菌细胞悬液会出现积液，导致菌体堆积，影响分离效果。

（4）培养基上接种后将平板进行倒置培养的目的是防止冷凝后形成的水珠滴落在培养基上污染培养基；恒温培养箱的温度控制在22℃左右，其主要目的是为酵母菌细胞的生长、繁殖提供适宜的温度。

（5）根据实验结果推测，图3抗性菌落主要位于图2 中B端，其具有抗药性的主要原因是酵母菌合成更高浓度的吡哆醇，以克服异烟肼的竞争性抑制。