题目内容
【题目】（下面是将乙肝病毒表面主蛋白基因HBsAg导入巴斯德毕赤酵母菌生产乙肝疫苗的过程图。巴斯德毕赤酵母菌是一种甲基营养型酵母，能将甲醇作为其唯一碳源。该酵母菌体内无天然质粒，科学家改造出了图1所示的pPIC9K质粒用作载体，其与目的基因形成的重组质粒经酶切后可以与酵母菌染色体发生同源重组，将目的基因整合于染色体中以实现表达。已知当甲醇作为唯一碳源时，该酵母菌中AOX1基因受到诱导而表达（5A0X1和3AOX1（TT）分别是基因AOX1的启动子和终止子）。请分析回答：
（1）为实现HBsAg基因和pPIC9K质粒重组，应该选择______切割质粒，并在HBsAg基因两侧的A和B位置接上______，这样设计的优点是______。
（2）酶切获取HBsAg基因后，需用______将其连接到pPIC9K质粒上，形成重组质粒，并将其导入大肠杆菌以获取______。
（3）步骤3中应选用限制酶______来切割重组质粒以获得重组DNA，然后再将其导入巴斯德毕赤酵母菌细胞。
（4）为了确认巴斯德毕赤酵母菌转化是否成功，在培养基中应该加入______以便筛选；若要检测转化后的细胞中是否含有HBsAg基因转录产物，可以用______方法进行检测。
（5）转化的酵母菌在培养基上培养一段时间后，需要向其中加入______以维持其生活，同时诱导HBSAg基因表达。
【答案】SnaB I、Avr Ⅱ 相应的限制酶识别序列 确保定向连接（避免质粒和目的基因自身环化及自连） DNA连接酶 大量重组质粒 BgIⅡ 卡拉霉素 分子杂交 甲醇
【解析】
分析题图该题考查基因工程的基本操作程序，结合题图及题干信息，综合运用所学知识逐项作答。
（1）分析题图：SnaB、AvrⅡ、BglⅡ和SacI限制酶切割位点，其中SacI位于启动子上，BglⅡ位于终止子上。为实现HBsAg基因和pPIC9K质粒重组，只能用限制酶SnaB和AvrⅡ切割质粒，并在HBsAg基因两侧的A和B位置接上相应的限制酶识别序列，这样设计的优点是确保定向连接（避免质粒和目的基因自身环化及自连）。
（2）酶切获取HBsAg基因后，需用DNA连接酶将其连接到pPIC9K质粒上，形成重组质粒，并将其导入大肠杆菌以获取大量重组质粒。
（3）结合（1），步骤3中应选用限制酶BgIⅡ来切割重组质粒以获得重组DNA，然后再将其导入巴斯德毕赤酵母菌细胞。
（4）5′AOX1--3′AOX1段基因含有卡拉霉素抗性基因，为了确认巴斯德毕赤酵母菌转化是否成功，在培养基中应该加入卡拉霉素以便筛选；若要检测转化后的细胞中是否含有HBsAg基因转录产物，可以用分子杂交方法进行检测。
（5）转化的酵母菌在培养基上培养一段时间后，需要向其中加入甲醇以维持其生活，同时诱导HBSAg基因表达。
黄冈海淀全程培优测试卷系列答案
【题目】如图1所示的甲、乙、丙三个渗透装置中，三个漏斗颈的内径相等，漏斗内盛有浓度相同的蔗糖浓液，且漏斗内液面高度相同，漏斗口均封以半透膜，置于同一个水槽的清水中。三个渗透装置的半透膜的面积和所盛蔗糖溶液的体积不同，如下表所示。
装置编号 | 甲 | 乙 | 丙 |
半透膜面积 | S | S/2 | S |
蔗糖溶液体积 | T | T | 2T |
图2中曲线1、2、3表示漏斗液面高度随时间的变化情况。则曲线1、2、3与甲、乙、丙三个装置的对应关系是 ( )
A. 1－丙；2－甲；3－乙 B. 1－乙；2－甲；3－丙
C. 1－甲；2－乙；3－丙 D. 1－丙；2－乙；3－甲
