题目内容

【题目】薰衣草精油气味芳香,能够清热解毒,清洁皮肤,美白祛斑,深受女性朋友的喜爱。研究还发现薰衣草精油有抑菌作用,请回答下列问题。

1)根据薰衣草精油________________________________等以上特点,可用水蒸气蒸馏法提取薰衣草精油。若要将薰衣草油与水分开,可在油水混合物中加入____________________,即会出现明显的分层。在蒸馏时,温度不能___________,时间不能__________,否则品质比较差。

2)科研人员进行探究薰衣草精油抑菌作用的实验,实验所用的培养基需要进行__________灭菌,接种后需要计数,一般采用的接种方法是__________________

3)科研人员以平板中透明圈的大小来比较薰衣草精油对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的抑制效果,如下表所示:

薰衣草精油浓度(g/disc

05

1

25

大肠杆菌抑菌圈直径(mm

672

693

866

金黄色葡萄球菌抑菌圈直径(mm

58

621

695

由上表可知,薰衣草精油对________________的抑制效果更好。由表中数据能否得知薰衣草精油对这两种菌抑制效果最佳的浓度?__________________

【答案】化学性质稳定,难溶于水,可被水蒸气带出 NaCl 太高 太短 高压蒸汽 稀释涂布平板法 大肠杆菌 不能(或否)

【解析】

1、植物芳香油的提取方法:蒸馏法、压榨法和萃取等。

1)蒸馏法:芳香油具有挥发性把含有芳香油的花、叶等放入水中加热,水蒸气能将挥发性较强的芳香油携带出来,形成油水混合物;冷却后,油水混合物又会重新分成油层和水层,除去水层便得到芳香油,这种提取方法叫蒸馏法。根据蒸馏过程中原料放置的位置的标准,将水蒸气蒸馏法划分为水中蒸馏、水上蒸馏和水气蒸馏。

2)萃取法:这种方法需要将新鲜的香花等植物材料浸泡在乙醚、石油醚等低沸点的有机溶剂中,使芳香油充分溶解,然后蒸去低沸点的溶剂,剩下的就是芳香(3)压榨法:在橘子、柠檬、甜橙等植物的果皮中,芳香油的含量较多,可以用机械压力直接榨出,这种提取方法叫压榨法。

2、微生物常见的接种的方法

①平板划线法:将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板,接种,划线,在恒温箱里培养在线的开始部分,微生物往往连在一起生长,随着线的延伸,菌数逐渐减少,最后可能形成单个菌落。

②稀释涂布平板法:将待分离的菌液经过大量稀释后,均匀涂布在培养皿表面,经培养后可形成单个菌落。

其中,稀释涂布平板法可用于对微生物进行计数

1)薰衣草精油化学性质稳定,不溶于水,可被水蒸气带出,因此可用水蒸气蒸馏法提取薰衣草精油。若要将薰衣草油与水分开,可在油水混合物中加入NaCl,即会出现明显的分层。注意蒸馏的温度不能太高,时间不能太短,否则品质比较差。

2)探究薰衣草精油抑菌作用的实验所用的培养基需要进行高压蒸汽灭菌,接种微生物常用平板划线法和稀释涂布平板法,其中稀释涂布平板法可用于微生物的计数。

3)根据表中数据可知,大肠杆菌抑菌圈直接大于金黄色葡萄球菌抑菌圈直径,这说明薰衣草精油对大肠杆菌抑菌效果更好。表中,随着薰衣草精油浓度的升高,大肠杆菌抑菌圈的直接逐渐变大,因此据此不能得知薰衣草精油对大肠杆菌抑菌效果的最佳浓度。

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【题目】回答下列(一)、(二)小题:

(一)黄素单加氧酶(FMO)是转化吲哚合成靛蓝(一种染料)的一种重要的酶。为提高表达FMO的重组大肠杆菌合成靛蓝的效率,对重组菌进行了固定化研究。回答下列问题:

1)重组大肠杆菌的扩大培养:用_______________________挑取大肠杆菌单菌落接种于LB液体培养基中,放在______________________ 填设备)上培养过夜,将过夜培养物1mL转移至100mL LB液体培养基中继续培养。该过程所用培养基对于酸碱度的要求是_________________

2)重组大肠杆菌的固定化:分别使用卡拉胶、明胶、聚乙烯醇(网格较紧密,扩散性能最低)、海藻酸钠对重组大肠杆菌进行________ (填固定化方式)并分析各自对_________的转化效率。

3)靛蓝取转化液5mL,离心后,沉淀部分用于靛蓝分析。沉淀用蒸馏水洗两遍,再用NN-二甲基甲酰胺溶解,再离心,取上清液于610nm处测定OD值,和________________对照即得到靛蓝浓度。若所测得的OD值过大应采用的最佳措施是________________________

4)影响重组大肠杆菌转化吲哚合成靛蓝效率的因素有很多,如:工程菌FMO诱导表达的条件、固定化颗粒的理化性质、反应时间、pH、温度、辅助因子的再生、________________________________(答出2 点即可)等。

(二)对疑似PRRS(猪繁殖与呼吸综合征)的病料(从得病的动物身上采集的组织或器官)进行病毒分离鉴定,获得一株高致病性PRRSV(猪繁殖与呼吸综合征病毒) ,通过对高致病性PRRSVN蛋白进行研究来探讨该蛋白的抗原特性,并制备抗N蛋白的单克隆抗体。回答下列问题:

1PRRSV N 蛋白基因的克隆:提取PRRSV中的总RNA,以其中相应的RNA作为模板,利用________________酶逆转录成cDNA。再以cDNA为模板进行________________扩增,而获得N蛋白基因。

2)表达N蛋白细胞的制备:用重组质粒________________合适的大肠杆菌细胞,为提高该过程的效率,需考虑重组质粒的___________________________等。将筛选过的受体细胞 37℃过夜培养。

3)单克隆抗体的制备与检测:取免疫小鼠的脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合待融合细胞生长到培养孔底面积的1/10时进行________________________(填物质)筛选。检出的阳性孔用有限稀释法进行多次克隆化,建立单克隆抗体________________。最终获得的单克隆抗体是否达到实验要求的标志是_________________________,与无关蛋白不发生反应。

4)猪干细胞的应用:胚胎干细胞可以进行________________________________,获得适合猴子移植的猪器官,减弱或消除排斥反应。

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