题目内容

【题目】下列关于建立cDNA文库过程的叙述中,不正确的一项是

A. 从特定组织或细胞中提取DNARNA

B. 用逆转录酶合成mRNA的互补单链DNA

C. 以新合成的单链DNA为模板合成双链DNA

D. 新合成的双链DNA需要连接在运载体上

【答案】A

【解析】

1、基因文库包括基因组文库和部分基因文库。其中基因组文库包含某种生物所有的基因,而部分基因文库只包含某种生物的部分基因,如:cDNA文库。
2、以mRNA为模板,经反转录酶催化,在体外反转录成cDNA,与适当的载体(常用噬菌体或质粒载体)连接后转化受体菌,则每个细菌含有一段cDNA,并能繁殖扩增,这样包含着细胞全部mRNA信息的cDNA克隆集合称为该组织细胞的cDNA文库。

A、cDNA文库中的DNA来源于mRNA的反转录过程,所以不需要从特定组织或细胞中提取DNA或RNA,A错误;
BC、利用mRNA在逆转录酶的作用下反转录合成互补的单链DNA片段,以新合成的单链DNA为模板再互补形成双链DNA,BC正确;
D、在cDNA文库中,合成的互补DNA片段需要连接在载体上,D正确。
故选A。

练习册系列答案
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【题目】单克隆抗体在诊断和治疗中具有广泛的应用。已知一般细胞的DNA合成途径有起始合成途径和中间合成途径两种,氨基蝶呤(A)可以阻碍起始合成途经,次黄嘌呤(H)及胸腺嘧啶核苷(T)则是中间合成途径所必需的物质。骨髓瘤细胞只有起始合成途径。在HAT培养基中含有次黄嘌呤(H)、氨基蝶呤(A)及胸腺嘧啶核苷(T)。下面是制备单克隆抗体的基本步骤:

步骤1:对小鼠多次注射特定抗原,制备淋巴细胞。

步骤2:细胞融合与杂交瘤细胞的选择性培养。最后一次免疫后第3天制备脾细胞悬液;筛选出途径缺失的骨髓瘤细胞,于对数生长期(又称指数生长期,即细胞以指数形式增加)制备骨髓瘤细胞悬液;取适量的脾细胞与骨髓瘤细胞进行混合,对它们进行诱导融合处理;用HAT培养基对处理后的细胞进行培养。

步骤3:二次筛选。

步骤4:大规模培养杂交瘤细胞,批量生产单克隆抗体。

回答下列问题:

1)步骤1中对小鼠多次注射特定抗原的目的是________________________;实验所需淋巴细胞可由________________细胞增殖分化而来。

2)于对数生长期制备骨髓瘤细胞悬液的原因是________________________________;为使HAT培养基上只有杂交瘤细胞可以存活,步骤2中应填________

3)步骤3中二次筛选可通过________________________法进行目的抗体的检测,筛选出________________细胞。

4)在体外对杂交瘤细胞进行克隆化培养时,为维持无菌无毒的环境,应进行的操作是_______________________________________________________________________。实验发现,在杂交瘤细胞的体外培养过程中,加入饲养层细胞比不加的生长要好,可能的原因是________________________________________

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