题目内容
【题目】2012年4月，世界首例转乳糖酶基因奶牛“克拉斯”在我国内蒙古大学生命科学院生物制造重点实验室诞生。2011年5月，科研人员在一头黑白花奶牛（甲）怀孕45天的一个胎儿（乙）中提取成纤维细胞，然后用病毒作运载体把乳糖酶基因转到该细胞中，接着再将该细胞注入到去核的卵母细胞中，再在体外将该杂合细胞培养成早期胚胎，然后将胚胎移植到代孕母牛（丙）的子宫内，283天后，代孕母牛正常分娩，“克拉斯”就此诞生；科研人员预期，“克拉斯”所产的牛奶中，乳糖含量将大大降低，这样的牛奶适合于乳糖不耐症的人群的饮用。
（1）人类婴幼儿时期以乳汁为食，此时小肠上皮细胞是能够产生乳糖酶的，但成年后乳汁摄入很少，尤其在亚洲人群中，乳糖酶基因的表达受到抑制，这体现了基因表达在 上的差异。
（2）“克拉斯”是否是一头真正的转基因牛，可以对其基因进行检测，检测的原理是 。
（3）“克拉斯”转入的目的基因是 ，该基因只在 细胞中表达。
（4）将早期胚胎移植到代孕母牛（丙）子宫内时，必须对丙注射 ，使其子宫适合于胚胎的着床，囊胚时期的 细胞发育为胎膜和胎盘，可与子宫建立正常的生理和组织联系。
（5）“克拉斯”的培育过程涉及的生物技术有 、 、 。
【答案】（1）时间 （2）DNA分子杂交原理 （3） 乳糖酶基因 乳腺 （4）激素（或孕激素） 滋养层 （5）转基因技术（或DNA重组技术） 体细胞核移植技术 胚胎移植技术
【解析】
试题分析：（1）人类婴幼儿时期能够产生乳糖酶，但是成年后不能，这体现了基因表达在个体不同时期的差异，即时间上的差异。
（2）检测目的基因是否成功导入受体细胞，可用DNA分子杂交原理。
（3）据题意分析，用病毒作运载体把乳糖酶基因转到成纤维细胞，形成重组细胞，故目的基因是乳糖酶基因。“克拉斯”所产的牛奶中，乳糖含量将大大降低，故该基因只在乳腺细胞表达。
（4）胚胎移植受体必须处于与供体相同生理状态，故必须对丙注射孕激素，使其子宫适合于胚胎的着床。囊胚时期的滋养层细胞发育为胎膜和胎盘，内细胞团发育为胎儿各种组织。
（5）用病毒作运载体把乳糖酶基因转到该细胞中为基因工程技术；将该细胞注入到去核的卵母细胞中为体细胞核移植技术；胚胎移植到代孕母牛（丙）的子宫内为胚胎移植技术。
【题目】回答下列办关温度与酶活性的问题：
（1）温度对唾液淀粉酶活性影响的实验：
将盛有2mL唾液淀粉酶溶液的试管和盛有2mL可溶性淀粉溶液的试管编为一组，共四组。在0℃、20℃室温、37℃、100℃水浴中各放入一组维持各自的温度5min。然后，将淀粉酶溶液注入相同温度下的淀粉溶液中，摇匀后继续放回原来的温度下保温，把_______________的时间作为本实验的起始时间记录下来。再每隔一分钟，取一滴混合液滴在盛有碘液的点滴板上进行观察，记录每种混合液蓝色消失的时间。通过比较混合液中__________（填物质名称）消失所用时间的长短来推知酶的活性。预计__________温度下混合液因其中的酶失去活性蓝色不会消失。
（2）温度对酶活性的影响主要体现在两个方面。其一，随温度的升高会使____________接触的机会增多，反应速率变快。其二，因为大多数酶的化学本质是蛋白质，本身随温度升高会发生____________的改变，温度升到一定程度，酶将完全失活。这两种作用叠加在一起，使酶促反应在某一温度下最快，这一温度就是该酶的____________。
（3）科研人员通过蛋白质工程来设计改变酶的构象。在研究溶菌酶的过程中，得到了多种突变酶，测得酶50%发生变性时的温度（Tm），部分结果见下表：
酶 | 半胱氨酸（Cys）的位置和数目 | 二硫键数目 | Tm/℃ |
野生型T4溶菌酶 | Cys51，Cys97 | 无 | 41.9 |
突变酶C | Cys21，Cys143 | 1 | 52.9 |
突变酶F | Cys3，Cys9，Cys121，Cys142，Cys164 | 3 | 65.5 |
（注：Cys上角的数字表示半胱氨酸在肽键的位置）
溶菌酶热稳定性的提高，是通过改变____________和增加____________得以实现的。