Question

【题目】为了研究如何提高油菜种子的含油量，研究者将转运肽基因与酶D基因相连，导入油菜细胞并获得了转基因油菜．请据图回答：
（1）研究人采用PCR技术获取酶D基因和转运肽基因，该技术是利用的原理，使相应基因呈指数增加．此技术中最重要的酶是 ． 三种限制酶（Xbal、Clal、SacI）的切点如图所示，则用和酶处理两个基因后，可得到两基因相连的融合基因．
（2）将上述融合基因插入如图所示Ti质粒的中构建基因表达载体，说明此结构的两端有和酶的切割序列．然后把重组质粒导入农杆菌中，为了获得含融合基因的单菌落，应进行的操作是 ， 然后再利用液体培养基将该单菌落振荡培养，可以得到用于转化的侵染液．
（3）剪取油菜的叶片放入侵染液中一段时间，此过程的目的是 ， 进一步筛选后获得转基因油菜细胞，依据的原理，可将其培育成转基因油菜植株．
（4）用法可检测转基因油菜植株中的融合基因是否成功表达．

Answer 1

【答案】
（1）DNA复制；耐高温的DNA聚合酶；ClaⅠ；DNA连接
（2）T﹣DNA；XbaⅠ；SacⅠ；将获得的农杆菌接种在含四环素的固体培养基上培养
（3）利用农杆菌将融合基因导入油菜细胞；细胞具有全能性
（4）抗原﹣抗体杂交
【解析】解：（1）PCR技术利用的原理是DNA双链复制，从拟南芥基因文库中获取转运肽基因．此技术中最重要的酶是耐高温的DNA聚合酶．用ClaⅠ限制酶和DNA连接酶处理两个基因后，可以得到A、D端相连的融合基因．（2）将上述融合基因插入图中Ti质粒的T﹣DNA中，能够构建表达载体即重组质粒，说明此结构的两端有XbaⅠ和SacⅠ酶的切割序列．将获得的农杆菌接种在含四环素的固体平板上培养得到单菌落，再利用液体培养基震荡培养，可以得到用于转化的浸染液．（3）剪取油菜的叶片放入侵染液中一段时间，此过程的目的是利用农杆菌将融合基因导入油菜细胞，进一步筛选后获得转基因油菜细胞．依据细胞具有全能性的原理，通过植物组织培养技术，可培育成转基因油菜植株．（4）用抗原﹣抗体杂交法可检测转基因油菜植株中的融合基因是否成功表达．
【考点精析】本题主要考查了基因工程的原理及技术的相关知识点，需要掌握基因工程的原理是利用DNA重组技术才能正确解答此题．