Question

【题目】地铁是北京市重要的轨道交通系统，2018年共运送乘客31．16亿人次。研究人员对地铁设施的微生物分布情况进行了一系列调查。

（1）样本的采集：用经___________处理的棉签蘸取肉汤培养基，在座椅、滚梯扶手等各处的接触面来回擦拭收集样品。所有样品采集完后，均储存于装有1ml肉汤培养基的离心管里。

（2）细菌总数的测定：将储存在离心管中的样品___________后吸取100μL样品注入盛有900μL___________的离心管中，制成10l稀释倍数样品。按照相同的方法，制备系列稀释样品匀液，涂布接种在___________(填“固体”或“液体”)培养基上，置于___________中培养48h后计数。

（3）细菌的分离和纯化：用___________蘸取离心管中样品，划线接种到玛嘉尿道定位显色培养基上，培养后深蓝色菌落即为大肠杆菌。其余种类微生物按说明书挑取对应颜色的菌落。玛嘉尿道定位显色培养基是具有___________(填“选择”或“鉴别”)作用的培养基。

（4）各种耐药菌的分离鉴定：将603份样本在添加相应抗生素的培养基培养后共得到154株菌株，具体结果如下

采样点	样本类型	样本数	分离出耐药菌的样本数	分离率
地铁车厢	扶手	216	73	33．80%
	座椅	216	43	19．91%
	门把手	72	26	36．11%
地铁外环境	自动售票机	17	5	29．41%
	滚梯扶手	42	4	9．52%
地铁卫生间	洗手台	20	3	15．00%
	卫生间门	20	0	0．00%

(注：分离率=分离出耐药菌的样本数/样本数×100%)

请比较3个采样点的耐药菌分离率情况，并分析造成3个采样点分离率存在差异的可能原因。__________。

Answer 1

【答案】灭菌 振荡均匀 无菌水 固体 恒温培养箱 接种环 鉴别 分离率比较：地铁车厢>地铁外环境>地铁卫生间；原因地铁卫生间的分离率最低的原因：有专人打扫，清洁频率高等；地铁车厢的分离率最高的原因：车厢相对封闭，空气不流通，人员密集，地铁线路长导致打扫频次低等。地铁外环境分离率居中的原因：封闭程度打扫频率介于两者之间

【解析】

1、稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落.由于两个或多个细胞连在一起，观察到的只是一个菌落，因此其统计的数值往往比实际数目偏低。

2、培养基按功能分有选择培养基和鉴别培养基。

种类	制备方法	特征	用途
选择培养基	培养基中加入某种化学成分	根据某种微生物的特殊营养要求或其对某化学、物理因素的抗性而设计的培养基使混合菌样中的劣势菌变成优势菌，从而提高该菌的筛选率	加入青霉素分离得到酵母菌和霉菌
鉴别培养基	加入某种试剂或化学药品	依据微生物产生的某种代谢产物与培养基中特定试剂或化学药品反应，产生明显的特征变化而设计	鉴别和区分菌落相似的微生物伊红和美蓝培养基可以鉴别大肠杆菌

（1）样本的采集：用经灭菌处理的棉签蘸取肉汤培养基，在座椅、滚梯扶手等各处的接触面来回擦拭收集样品。

（2）细菌总数的测定：将储存在离心管中的样品震荡均匀后吸取100μL样品注入盛有900μL无菌水的离心管中，制成10l稀释倍数样品。按照相同的方法，制备系列稀释样品匀液，涂布接种在固体培养基上，置于恒温培养箱中培养48h后计数。

（3）细菌的分离和纯化：用接种环蘸取离心管中样品，划线接种到玛嘉尿道定位显色培养基上，培养后深蓝色菌落即为大肠杆菌。其余种类微生物按说明书挑取对应颜色的菌落。故玛嘉尿道定位显色培养基属于鉴别培养基。

（4）由表格数据可知，3个采样点的耐药菌分离率比较为地铁车厢>地铁外环境>地铁卫生间。原因地铁卫生间的分离率最低的原因：有专人打扫，清洁频率高等；地铁车厢的分离率最高的原因：车厢相对封闭，空气不流通，人员密集，地铁线路长导致打扫频次低等。地铁外环境分离率居中的原因：封闭程度打扫频率介于两者之间。