Question

【题目】科研人员利用胚胎干细胞（ES细胞）对干扰素基因缺失小鼠进行基因治疗．其技术流程如下图1：

（1）步骤①中，在核移植前应去除卵母细胞的 ．

（2）将基因导入ES细胞而不是导入到上皮细胞是因为 ．

（3）步骤③中，需要构建含有干扰素基因的 ．构建前利用PCR技术扩增干扰素基因时，可以从图2中A、B、C、D四种单链DNA片段中选取 作为引物．对干扰素基因片段和质粒进行酶切时，可选用限制酶的组合为 ．

（4）将步骤③获得的ES细胞在荧光显微镜下观察，选择发 色荧光的细胞进行体外诱导．为检测干扰素基因是否表达，可以采用 的方法．

Answer 1

【答案】（1）细胞核

（2）ES细胞具有全能性

（3）基因表达载体 B和C HindⅢ和PstⅠ或EcoRⅠ和PstⅠ

（4）绿 抗原﹣抗体杂交

【解析】

试题分析：分析图1：①表示核移植过程；②表示早期胚胎培养过程；③表示将目的基因导入ES细胞．

分析图2：该DNA片段含有四种限制酶识别序列和切割位点，其中SamⅠ酶的识别序列和切割位点位于目的基因上．

分析图3：图3为质粒结构示意图，该质粒含有2个标记基因（红色荧光标记基因和绿色荧光标记基因）．

解：（1）核移植是将体细胞核移植到去核的卵母细胞中，所以实验前要去除卵母细胞的细胞核．

（2）将基因导入ES细胞而不是导入到上皮细胞是因为ES细胞具有全能性．

（3）步骤③是将目的基因导入ES细胞，该过程之前需要构建基因表达载体；DNA复制只能从5’到3’，因此构建前利用PCR技术扩增干扰素基因时，可以从图2中A、B、C、D四种单链DNA片段中选取B和C作为引物．由图可知，SamⅠ酶的识别序列和切割位点位于目的基因上，用该酶切割会破坏目的基因，因此对干扰素基因片段和质粒进行酶切时，可选用限制酶HindⅢ和PstⅠ或EcoRⅠ和PstⅠ．

（4）用限制酶HindⅢ和PstⅠ或EcoRⅠ和PstⅠ切割时会破坏红色荧光蛋白基因，但不会破坏绿色荧光蛋白基因，因此将步骤③获得的ES细胞在荧光显微镜下观察，选择发绿色荧光的细胞进行体外诱导．为检测干扰素基因是否表达，可以采用抗原﹣抗体杂交法．

故答案为：

（1）细胞核

（2）ES细胞具有全能性

（3）基因表达载体 B和C HindⅢ和PstⅠ或EcoRⅠ和PstⅠ

（4）绿 抗原﹣抗体杂交