题目内容
【题目】肺细胞中的let-7基因表达减弱,癌基因RAS表达增强,会引发肺癌.研究人员利用基因工程技术将let-7基因导入肺癌细胞实现表达,发现肺癌细胞的增殖受到抑制,该基因工程技术基本流程如图1,研究发现let-7基因能影响癌基因RAS的表达,其影响机理如图2,请回答下列问题:
(1)进行图1过程①时,需用______酶切开载体以插入let-7基因.载体应有RNA聚合酶识别和结合的部位,以驱动let-7基因转录,该部位称为_____________.
(2)图1中重组载体导入肺癌细胞的常用方法是_____________
(3)根据图2分析,可从细胞中提取______进行分子杂交,以直接检测let-7基因是否转录.肺癌细胞增殖受到抑制,可能是由于细胞中______含量减少引起的,其实质是遗传信息表达时______过程受阻,导致RAS基因沉默.
【答案】
(1)限制性核酸内切(或限制) 启动子
(2)显微注射法
(3)let-7基因的RNA (miRNA) RAS蛋白 翻译
【解析】
(1)过程①表示基因表达载体的构建,在该过程中需要用限制性核酸内切酶(简称限制酶)对载体进行切割,以便于目的基因的插入;启动子是一段特殊的DNA序列,是RNA聚合酶识别和结合的位点,RNA聚合酶结合到该位点,可驱动转录过程.
(2)目的基因导入动物细胞中一般采用显微注射法.如果肺癌细胞中导入重组载体,则肺癌细胞的增殖将受到影响,因此可以通过对细胞进行培养观察细胞增殖的速率,并与正常肺癌细胞的增殖速率进行比较得出相应结论.
(3)判断目的基因是否在受体细胞中转录,可用分子杂交技术来检测,从细胞中提取mRNA和用放射性同位素或者荧光标记的目的基因单链DNA片段进行杂交.根据题中信息“肺细胞中的let-7基因表达减弱,癌基因RAS表达增强,会引发肺癌”知,导入let-7基因后,肺癌细胞的增殖受到抑制;据图2可知,let-7基因影响RAS基因表达的机理是:let-7基因转录产物miRNA与RAS基因转录产物RAS mRNA结合,使RAS基因翻译受到抑制,引起细胞中的RAS蛋白含量减少,进而导致癌细胞增殖受到抑制.