题目内容

【题目】肺细胞中的let-7基因表达减弱,癌基因RAS表达增强,会引发肺癌研究人员利用基因工程技术将let-7基因导入肺癌细胞实现表达,发现肺癌细胞的增殖受到抑制,该基因工程技术基本流程如图1,研究发现let-7基因能影响癌基因RAS的表达,其影响机理如图2,请回答下列问题:

1进行图1过程①时,需用______酶切开载体以插入let-7基因载体应有RNA聚合酶识别和结合的部位,以驱动let-7基因转录,该部位称为_____________

2图1中重组载体导入肺癌细胞的常用方法是_____________

3根据图2分析,可从细胞中提取______进行分子杂交,以直接检测let-7基因是否转录肺癌细胞增殖受到抑制,可能是由于细胞中______含量减少引起的,其实质是遗传信息表达时______过程受阻,导致RAS基因沉默

【答案】

1限制性核酸内切或限制 启动子

2显微注射法

3let-7基因RNA miRNA RAS蛋白 翻译

【解析】

1过程表示基因表达载体的构建,在该过程中需要用限制性核酸内切酶简称限制酶对载体进行切割,以便于目的基因的插入;启动子是一段特殊的DNA序列,是RNA聚合酶识别和结合的位点,RNA聚合酶结合到该位点,可驱动转录过程

2目的基因导入动物细胞中一般采用显微注射法如果肺癌细胞中导入重组载体,则肺癌细胞的增殖将受到影响,因此可以通过对细胞进行培养观察细胞增殖的速率,并与正常肺癌细胞的增殖速率进行比较得出相应结论

3判断目的基因是否在受体细胞中转录,可用分子杂交技术来检测,从细胞中提取mRNA和用放射性同位素或者荧光标记的目的基因单链DNA片段进行杂交根据题中信息肺细胞中的let-7基因表达减弱,癌基因RAS表达增强,会引发肺癌知,导入let-7基因后,肺癌细胞的增殖受到抑制;据图2可知,let-7基因影响RAS基因表达的机理是:let-7基因转录产物miRNA与RAS基因转录产物RAS mRNA结合,使RAS基因翻译受到抑制,引起细胞中的RAS蛋白含量减少,进而导致癌细胞增殖受到抑制

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