Question

【题目】人外周血单核细胞能合成白细胞介素2（IL﹣2）。该蛋白可增强机体免疫功能，在体内易被降解。研究人员将IL﹣2基因与人血清白蛋白（HSA）基因拼接成一个融合基因，并在酵母菌中表达，获得具有IL﹣2生理功能、且不易降解的IL﹣2﹣HSA融合蛋白。其技术流程如图。请回答：

（1）②过程需要 酶；表达载体1中的位点 （填字母）应为限制酶BglⅡ的识别位点，才能成功构建表达载体2。

（2）在上述基因工程的操作过程中一般需要遵循碱基互补配对原则的步骤有 （用序号表示）。

（3）表达载体2导入酵母菌后，融合基因转录出的mRNA中，与IL﹣2蛋白对应的碱基序列不能含有 ，才能成功表达出IL﹣2﹣HSA融合蛋白。

利用PCR扩增仪大量扩增目的基因的前提是目的基因的核苷酸序列要有一段是已知的，以便根据这一序列合成____ ______，除了该物质和目的基因外，扩增仪中还需加入四种脱氧核苷酸和____ ______酶，并适时调整温度，才能使目的基因数量成指数式增长。

Answer 1

【答案】（1）反（逆）转录酶 ；a ； （2）②③④ （3）终止密码子；

（4）引物；热稳定DNA聚合酶（Taq酶）

【解析】（1）据图可知，②过程是mRNA获得cDNA的逆转录过程，该过程需要逆转录酶；根据图解可知目的基因IL﹣2的两端分别是由限制酶EcoRⅠ、BglⅡ切割的，一般用同一限制酶切割才能形成相同的黏性末端，表达载体1中的启动子之后具有EcoRⅠ的识别位点，因此位点a应为限制酶BglⅡ的识别位点，才能成功构建表达载体2。

（2）在上述基因工程的操作过程中一般需要遵循碱基互补配对原则的步骤有②逆转录、③PCR技术扩增目的基因、④基因表达载体的构建。

（3）融合基因转录出的mRNA中，与IL﹣2蛋白对应的碱基序列中如果含有终止密码子，则会导致翻译终止，不能成功表达出IL﹣2﹣HSA融合蛋白。

（4）利用PCR扩增仪大量扩增目的基因的前提是目的基因的核苷酸序列要有一段是已知的，以便根据这一序列合成引物；扩增仪中除了需要加入引物、目的基因和四种脱氧核苷酸外，还需加入热稳定DNA聚合酶（Taq酶），并适时调整温度，才能使目的基因数量成指数形式增长。