Question

18．治疗性克隆对解决供体器官缺乏和器官移植后免疫排斥反应具有重要意义．流程如下：

（1）过程①采用的是细胞工程中的核移植技术，过程②采用的是胚胎工程中的（早期）胚胎培养技术．卵母细胞除从活体输卵管中采集外，还可以从处死的雌鼠卵巢中获取．图中的卵母细胞应在体外培养到减数第二次分裂中期．
（2）如果克隆过程中需进行基因改造，在构建基因表达载体（重组载体）时必须使用限制性核酸内切酶和DNA连接酶两种工具酶．基因表达载体上除目的基因外，还需有标记基因，以便选出成功导入基因表达载体的细胞．
（3）胚胎干细胞可以来自于囊胚中的内细胞团．在一定条件下，胚胎干细胞可以分化形成不同的组织器官．若将图中获得的组织器官移植给个体B（填“A”或“B”），则不会发生免疫排斥反应．
（4）下表是胚胎干细胞中三种细胞器的化学成分．

细胞器	蛋白质（%）	脂质（%）	核酸（%）
甲	67	28	微量
乙	59	40	0
丙	39	0	59

表中丙是核糖体，表中属于生物膜系统的细胞器有甲和乙，各种生物膜的结构和化学成分相似，但功能差别较大的原因是蛋白质的种类和数量不同
（5）现有-长度为1000碱基对（by）的DNA分子，用限酶EcoRI酶切后得到的DNA分子仍是1000by，说明此DNA分子为环状 （填“线性”或“环状”），用Kpn I单独酶切得到400by和600by两种长度的DNA分子，用EcoR I、Kpn I同时酶切后得到 200by和600by两种长度的DNA分子．请绘出该DNA分子的酶切图谱的示意图 （请在下框内画图，并标明限制酶的类型、酶切位点和碱基长度）．
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Answer 1

分析 1、治疗性克隆：指利用克隆技术产生特定细胞和组织（皮肤、神经或肌肉等）用于治疗性移植．
生殖性克隆：指将克隆技术用于生育目的，即用于产生人类个体．
2、分析题图：①是核移植技术，②是早期胚胎培养．
3、动物细胞培养的条件：
（1）无菌、无毒的环境：①消毒、灭菌；②添加一定量的抗生素；③定期更换培养液，以清除代谢废物．
（2）营养物质：糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素等，还需加入血清、血浆等天然物质．
（3）温度和PH：36.5℃±0.5℃；适宜的pH：7.2～7.4．
（4）气体环境：95%空气（细胞代谢必需的）和5%的CO₂（维持培养液的PH）．
4．分析表格甲乙丙三种细胞器的组成成分可知，甲是具膜细胞器且含有少量核酸，为线粒体，乙是具膜细胞器，无核酸，可能是内质网或高尔基体，丙只有蛋白质和核酸组成，不具有膜结构，且核酸含量很高，为核糖体．

解答 解：（1）过程①采用的是细胞工程中的核移植技术，过程②采用的是胚胎工程中的（早期）胚胎培养技术．对于实验动物大鼠，如果是从活体输卵管中采集的卵母细胞，可以直接与获能的精子在体外受精．如果是从已处死的雌鼠卵巢中采集的卵母细胞，需要在体外经人工培养成熟后（减数第二次分裂中期），才能与获能的精子受精．
（2）在构建基因表达载体（重组载体）时必须使用限制性核酸内切酶和DNA连接酶两种工具酶．基因表达载体上除目的基因外，还需有标记基因以便选出成功导入基因表达载体的细胞．
（3）胚胎干细胞可以来自于囊胚中的内细胞团，若将图中获得的组织器官移植给个体B不会发生免疫排斥反应．因为B是供核的一方，因此克隆的组织和器官的绝大多数遗传物质和B相同．
（4）丙只有蛋白质和核酸组成，不具有膜结构，且核酸含量很高，为核糖体；甲是具膜细胞器且含有少量核酸，为线粒体；乙是具膜细胞器，无核酸，可能是内质网或高尔基体．
（5）由于DNA分子用限制酶EcoR1酶切后得到的DNA分子仍是1000bp，说明此DNA分子为环状DNA．用Kpn1单独酶切，得到400bp和600bp两种长度的DNA分子片段，说明该酶在该DNA分子上具有两个切点；用EcoRI、Kpnl同时酶切后得到200bp和600bp两种长度的DNA分子片段，说明EcoRI的切点刚好在400bp片段的中间，由此画图即可．因此图为．
故答案为：
（1）（体细胞）核移植 （早期）胚胎培养  卵巢   减数第二次分裂中
（2）限制性核酸内切酶 DNA连接酶 标记
（3）内细胞团  B  
（4）核糖体  甲和乙   蛋白质的种类和数量不同
（5）环状、

点评 本题考查动物体细胞核移植技术、治疗性克隆等知识，提升学生分析问题和解决问题的能力，属于中档题．