Question

【题目】尿素是一种重要的农业肥料，经微生物分解后能更好地被植物利用。某生物兴趣小组试图探究土壤中微生物对尿素是否有分解作用，设计实验并成功筛选到能高效分解尿素的细菌（目的菌）。培养基成分如表所示。将表中物质溶解后，用蒸馏水定容到1000 mL。实验过程如图所示：

KH2HPO4	1.4g
Na2HPO4	2.1g
MgSO47H2O	0.2g
葡萄糖	10g
尿素	1g
琼脂	15g

请回答下列问题：

（1）微生物的生长繁殖所需的营养物质有碳源、水、无机盐和__________。该培养基能筛选出目的菌的原因是______________________________。

（2）使用稀释涂布平板法来统计样品中目的菌的数目时，统计的菌落数往往比活菌的实际数目低，原因是______________________________。

（3）初步筛选出来的菌种还需要进一步鉴定：在培养基中加入__________指示剂，接种并培养初步筛选的菌种，若指示剂变成__________色，则可说明该菌种能够分解尿素。

（4）在进行分离分解尿素的细菌实验时，A同学从培养基上筛选出大约50个菌落，而其他同学只选择出大约20个菌落。A同学的实验结果产生的原因可能有__________（写出两点即可）。

（5）为了确定目的菌产生脲酶分解尿素的最适温度，某同学测得在相同时间内，10g尿素在30℃、35℃、 40℃温度下降解后剩余量分别为8g、3g、9g。若要进一步确定酶的最适温度，应围绕__________℃设计后续实验。

Answer 1

【答案】氮源尿素是唯一的氮源，只有能利用尿素的微生物才能生长当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的是一个菌落酚红红所取土样不同、培养基被污染、接种操作错误等35

【解析】

本题考查微生物的培养、分离与计数，考查对培养基成分、微生物分离、计数方法的理解，解答此题，可根据培养基中成分判断该培养基上的物理性质和用途，根据稀释涂布平板法的原理分析该方法出现误差的可能原因。

（1）微生物的生长繁殖所需的营养物质除碳源、水、无机盐外，还需要氮源，用以合成蛋白质、核酸等物质。该培养基的唯一氮源为尿素，只有能分解尿素的细菌才能在该培养基上生长，所以能筛选出能高效分解尿素的细菌。

（2）使用稀释涂布平板法来统计样品中目的菌的数目时，由于连在一起的两个或多个细菌增殖后形成一个菌落，所以统计的菌落数往往比活菌的实际数目低。

（3）鉴定尿素分解菌，可在培养基中加入酚红指示剂，尿素分解菌可将尿素分解产生碱性物质氨，使培养基出现红色。

（4）A同学的统计数据大于其他同学，可能的原因是所取土样不同，不同土样中分解尿素的细菌数量不同；也可能是培养基被污染，或者是稀释涂布培养时接种操作错误。

（5）测得在相同时间内，10g尿素在30℃、35℃、 40℃温度下降解后剩余量分别为8g、3g、9g，35℃时尿素剩余量最少，说明酶的最适温度大约在35℃左右，应围绕35℃设计后续实验。

项目	优点	缺点
平板划线法	可以观察菌落特征，对混合菌进行分离	不能计数
稀释涂布平板法	可以计数，可以观察菌落特征	吸收量较少，较麻烦，平板不干燥效果不好，容易蔓延