Question

下表中列出几种限制酶识别序列及其切割位点，图1、图2中箭头表示相关限制酶的酶切位点。请回答下列问题。

（1）一个图1所示的质粒分子经SmaⅠ切割前后，分别含有　　　　个游离的磷酸基团。
（2）若对图中质粒进行改造，插入SmaⅠ酶切位点越多，质粒的热稳定性越　　　。用图中的质粒和外源DNA构建重组质粒，不能使用SmaⅠ，原因是　　　　　　　　　　。
（3）与使用EcoRⅠ相比较，使用BamHⅠ和HindⅢ两种限制酶同时处理质粒、外源DNA的优点在于可以防止　　　　　　　。
（4）为了获取重组质粒，将切割后的质粒与目的基因片段混合，并加入　　　酶。重组质粒中抗生素抗性基因的作用是为了　　　　　　　。
（5）为了从cDNA文库中分离获取蔗糖转运蛋白基因，将重组质粒导入丧失吸收蔗糖能力的大肠杆菌突变体，然后在　　　　　　　　　的培养基中培养，以完成目的基因表达的初步检测。

Answer 1

（7分）
（1）0，2　（2）高　SmaⅠ会破坏质粒的抗性基因，外源DNA中的目的基因　
（3）质粒和合目的基因的外源DNA片段自身环化
（4）DNA连接　鉴定和筛选合目的基因的细胞　
（5）蔗糖为唯一含碳营养物质

解析