Question

【题目】回答下列（一）、（二）小题

（一）人工瘤胃模仿了牛羊等反刍动物的胃，可用来发酵处理秸秆，提高秸秆的营养价值。为了增强发酵效果，研究人员从牛胃中筛选纤维素酶高产菌株，并对其降解纤维素能力进行了研究

（1）在样品稀释和涂布平板步骤中，下列选项不需要的是_________（填序号）

①酒精灯 ②培养皿 ③显微镜 ④无菌水

（2）在涂布平板时，滴加到培养基表面的菌悬液量不宜过多的原因是______________________。

（3）向试管内分装含琼脂的培养基时，若试管口粘附有培养基，需要用酒精棉球擦净的原因是____________________。

（4）刚果红可以与纤维素形成红色复合物，但并不与纤维素降解产物纤维二糖和葡萄糖发生这种反应。研究人员在刚果红培养基平板上，筛到了几株有透明降解圈的菌落（见图）。图中降解圈大小与纤维素酶的_____________有关。图中降解纤维素能力最强的菌株是_________（填图中序号）

（5）分离得到的纤维素酶高产菌 株若进行扩大培养需在_________条件下，用_________ (工具)完成接种。

（二）请回答关于葡萄酒生产和检测方面的问题

（1）各大酒庄酿制葡萄酒时，为保持各产区葡萄酒的特有口感，发酵菌种主要来自附在葡萄皮上的_________。该菌种在学生实验中也被频繁使用。实验室在保存该菌种时，通常将该菌种接种到_________培养基上，再放入冰箱中冷藏。

（2）某实验小组酿制的葡萄酒有一股酸味，从发酵条件分析，可能原因是_________导致醋杆菌大量生长产生醋酸，其反应式为__________________。

（3）该实验小组为研究过滤、沉淀后葡萄酒中的活菌数，检测流程如下所示。

取样→稀释→接种→培养→计数→统计→报告

①检测过程中，应将不同稀释度的样液用_________法分别接种于若干组平面培养基上，培养24～48小时出现_________后计数。

②下列关于检测流程的叙述中，正确的是_________

A．配制培养基时应在调节酸碱度以前灭菌

B．为防止外来微生物污染，应将培养皿倒置在超净台上培养

C．根据培养结果，只需统计适宜稀释度样液组的菌落数

D．理论上，统计分析结果会略高于实际活菌数

Answer 1

【答案】③ 培养基表面的菌悬液会出现积液，导致菌体堆积，影响分离效果 避免培养基污染棉塞 量与活性 ① 无菌 接种环 （野生）酵母菌 斜面 有氧条件∕有氧环境 略 涂布（ 分离） （单）菌落 C

【解析】

微生物培养的关键是无菌操作．微生物培养过程中除考虑营养条件外，还要考虑pH、温度和渗透压等条件，需对培养基和培养皿进行消毒．可以通过稀释涂布平板法或显微镜计数法进行统计计数。

刚果红可以与纤维素形成红色复合物，当纤维素被纤维素酶分解后，红色复合物无法形成，出现以纤维素分解菌为中心的透明圈，我们可以通过是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌。刚果红可以在细菌菌落形成前倒平板时加入，也可以在菌落形成后加入，若在细菌菌落形成前倒平板时加入刚果红，则所加刚果红要进行灭菌，以防杂菌的侵入，影响纤维素分解菌菌落的形成；若在菌落形成后加入刚果红，则不需要灭菌。

（一）

（1）在样品稀释和涂布平板步骤中，需要使用酒精灯对接种环进行灭菌，对培养皿进行灭菌，用无菌水稀释菌液，故选③。

（2）在涂布平板时，滴加到培养基表面的菌悬液量过多会在培养基表面出现积液，导致菌体堆积，影响分离效果，所以不能过多。

（3）分装含琼脂的培养基时，若试管口粘附有培养基，需要用酒精棉球擦净以防杂菌污染，避免培养基污染棉塞。

（4）在刚果红培养基平板上，筛到了几株有透明降解圈的菌落，降解圈大小与纤维素酶的多少和活性有关；纤维素酶的量越多，活性越强，分解的纤维素越多，透明降解圈越大，所以图中降解纤维素能力最强的菌株是①。

（5）分离得到的纤维素酶高产菌株，在固体培养基上，故进行扩大培养需在无菌条件下，用接种环 (工具)完成接种。

（二）

（1）为保持各产区葡萄酒的特有口感，可利用附在葡萄皮上的(野生)酵母菌作为菌种进行发酵；要保存菌种，可先将要保存的菌种接种到试管的固体斜面培养基上，在合适的温度下配以，当菌落长成后，将试管放入4℃的冰箱中冷藏保存。

（2）某实验小组酿制的葡萄酒有一股酸味，从发酵条件分析，可能原因是有氧条件导致醋酸菌大量生长产生醋酸。其反应式为C6H12O62C2H5OH + 2CO2 + 少量能量。

（3）①常用稀释涂布平板法来统计样品中活菌的数目。在检测过程中，应将不同稀释度的样液用涂布分离法分别接种于若干组平面培养基上，培养24-48小时出现(单)菌落后计数。

②培养基的pH值(酸碱度)直接影响培养物对离子的吸收，配制培养基时应在调节酸碱度以后灭菌，A项错误；倒置培养，一方面可防止凝结在皿盖上的水蒸流到培养基表面导致染菌，另一方面有利于菌种利用培养基营养，加快生长速度。但不是将培养皿直接倒置在超净台上，而是培养皿的盖子朝下,带培养基的底朝上，B项错误；当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌，通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约有多少个活菌，因此，可根据培养结果，只需统计适宜稀释度样液组的菌落数即可，C项正确；当两个或多个细菌连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落，因此理论上，统计分析结果会比实际活菌数目低，D项错误；故选C。