Question

【题目】通过设计引物，运用PCR技术可以实现目的基因的定点诱变。如图为基因工程中获取突变基因的过程，其中引物1序列中含有一个碱基T不能与目的基因片段配对，但不影响引物与模板链的整体配对，反应体系中引物1和引物2的5'端分别设计增加限制酶a和限制酶b的识别位点。有关叙述正确的是（　　）

A. 引物中设计两种限制酶识别位点有利于目的基因定向插入

B. 在PCR反应体系中还需要加入4种游离核苷酸、解旋酶、Taq酶等

C. 第3轮PCR，引物1能与图中②结合并且形成两条链等长的突变基因

D. 第3轮PCR结束后，含突变碱基对且两条链等长的DNA占1/2

Answer 1

【答案】AC

【解析】

根据图中可得，由于引物的一个碱基在不影响与模板链整体配对的前提下不与目的基因配对，再利用PCR技术实现了目的基因的定点诱变。其技术原理是碱基互补配对原则。

引物中设计两种限制酶识别位点，可以配合载体的限制酶识别位点，帮助目的基因定向定点插入质粒连接，A选项正确；PCR反应体系中需要加入引物、4种游离的核苷酸、Taq酶，不需要解旋酶，直接利用高温解旋，B选项错误；第3轮PCR中，物质②是引物2以引物1拓展得到的DNA链为模板进行复制得到的，故引物1能与图中②结合并且形成两条链等长的突变基因，C选项正确；第3轮PCR结束后，含突变碱基对且两条链等长的DNA只有一条，D选项错误。