题目内容
【题目】科研人员利用基因工程技术构建蜂鸟的基因组文库，研究β-球蛋白基因的功能，流程如图1所示。
（1）首先需要用同种__________处理蜂鸟的DNA和质粒，并用DNA连接酶处理，得到__________，再与经__________处理得到的感受态大肠杆菌混合。将混合物接种到添加__________的培养基上培养，一段时间后，选择颜色为__________（填“白色”或“蓝色”）的菌落进一步培养，获得导入蜂鸟DNA片段的大肠杆菌。用上述方法可以获得导入蜂鸟不同基因的大肠杆菌，构建出蜂鸟的__________。
（2）科研人员可从获得的大肠杆菌中提取__________，利用图2中的__________引物组合进行PCR，以进一步研究蜂鸟β-球蛋白基因的功能。
（3）导入大肠杆菌的蜂鸟β-球蛋白基因并未表达正常功能的蛋白质，可能的原因是__________。（写出一项即可）
【答案】限制性核酸内切酶 重组质粒 Ca2+ 氨苄青霉素和X 白色 基因文库 DNA B和D 大肠杆菌无法正常完成蜂鸟基因表达的肽链的加工
【解析】
质粒中有氨苄青霉素抗性基因和L基因，前者让受体细胞具有抗氨苄青霉素的能力，后者基因表达产物能使物质X呈现蓝色。在构建基因表达载体时，据图可知，氨苄亲霉素抗性基因完好，而L基因被破坏，因此使用添加了氨苄青霉素和物质X的培养基培养经经感染大肠杆菌时，应选择白色的菌落克隆培养，就能获得导入了重组质粒的大肠杆菌。
（1）将蜂鸟的β-球蛋白基因导入大肠杆菌前，需先构建基因表达载体，即先用同种限制酶处理蜂鸟的DNA和质粒，并用DNA连接酶酶进一步处理以得到重组质粒；将目的基因导入微生物细胞常用感受态细胞法，即用Ca2+处理微生物细胞，使其处于易于吸收周围环境中DNA分子的感受态；由于重组质粒中含有氨苄青霉素抗性基因，且L基因被破坏，因此应使用添加了氨苄青霉素和物质X的培养基培养经上述处理的大肠杆菌，一段时间后，选择白色的菌落克隆培养。用上述方法可以获得导入蜂鸟各种基因的诸多大肠杆菌的克隆，形成蜂鸟的基因文库。
（2）科研人员可从获得的大肠杆菌中提取DNA，用图2中的B和D两种引物完成PCR扩增（子链延伸的方向是5′→3′），以进一步研究蜂鸟β-球蛋白基因的功能。
（3）导入大肠杆菌的蜂鸟β-球蛋白基因并未表达正常功能的蛋白质，可能的原因是：大肠杆菌是原核生物，无法正常完成蜂鸟基因表达的肽链的加工过程。
