Question

12．人组织纤溶酶原激活物（htPA）是一种重要的药用蛋白，可在转htPA基因母羊的羊乳中获得．流程如下：

（1）为获取更多的卵（母）细胞，要对供体母羊注射 ①促性腺激素，使其超数排卵．采集的精子需要经过 ②获能处理，才具备受精能力．
（2）将htPA基因与质粒构建重组表达载体的过程中，下列哪项是必需的（③A）
A．限制酶和DNA连接酶      B．DNA连接酶和DNA聚合酶
C．DNA聚合酶和逆转录酶    D．限制酶和DNA聚合酶
（3）转基因羊的培育过程中，常用受精卵作为外源基因的受体细胞，主要原因是 ④受精卵的全能性易于表达．
为了获得母羊，胚胎移植前需对已成功转入目的基因的胚胎进行 ⑤性别鉴定．利用胚胎分割和胚胎移植技术可获得多个转基因个体，这些个体的基因型 ⑥相同．
（4）若在转htPA基因母羊的羊乳中检测到 ⑦htPA（或人组织纤溶酶原激活物），说明目的基因成功表达．
（5）质粒是基因工程中常用的基因载体，下列哪项不是质粒作为基因载体必需的（⑧D）
A．具控制质粒转移的基因        B．具标记基因      C．具多个限制酶的单切点        D．具有终止密码．

Answer 1

分析 DNA重组技术至少需要三种工具：限制性核酸内切酶（限制酶）、DNA连接酶、运载体．
目的基因分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术．
该基因工程需要对羊的性别进行选择，由于只有母羊能够分泌乳汁，因此选择母羊的胚胎进行移植．

解答 解：（1）为获取更多的卵（母）细胞，要对供体母羊注射促性腺激素，使其超数排卵．采集的精子需要经过获能处理，才具备受精能力．
（2）将htPA基因与质粒构建重组表达载体的过程中，需要用到的工具酶为限制酶和DNA连接酶．
（3）转基因羊的培育过程中，常用受精卵作为外源基因的受体细胞，主要原因是受精卵的全能性易于表达．为了获得母羊，胚胎移植前需对已成功转入目的基因的胚胎进行性别鉴定．利用胚胎分割和胚胎移植技术可获得多个转基因个体，这些个体的生殖方式属于无性生殖，这些个体的基因型相同．
（4）若在转htPA基因母羊的羊乳中检测到htPA（或人组织纤溶酶原激活物），说明目的基因成功表达．
（5）作为运载体必须具备的条件：①要具有限制酶的切割位点； ②要有标记基因（如抗性基因），以便于重组后重组子的筛选；③能在宿主细胞中稳定存在并复制；④是安全的，对受体细胞无害，而且要易从供体细胞分离出来．而终止密码存在于mRNA上，不存在于质粒．
故答案为：
（1）促性腺激素    获能处理
（2）A
（3）受精卵的全能性易于表达    性别鉴定    相同
（4）htPA（或人组织纤溶酶原激活物）
（5）D

点评 本题考查了基因工程和胚胎工程的相关知识，要求考生能够识记基因工程的操作步骤；明确该基因工程中需要选择母羊进行胚胎移植；要求考生具有扎实的基础知识，难度适中，属于考纲中识记、理解层次的考查．