Question

【题目】胚胎干细胞（ES细胞）介导法是转基因动物培育的途径之一，请据下图绿色荧光蛋白老鼠的培育流程回答相关问题：

（1）胚胎干细胞是由早期胚胎或原始性腺中分离出来的一类细胞，在形态上，表现为_________，在体外培养的条件下具有__________的特点。

（2）基因表达载体的构建是基因工程的核心步骤，此过程中常用到的酶是__________。将修饰后的绿色荧光蛋白基因导人ES细胞常采用的方法是__________；培养过程中，ES细胞所需的气体主要有02和C02，其中02是__________，C02用来维持培养液的pH值。

（3）为检测ES细胞的染色体上是否含有绿色荧光蛋白基因，在分子水平上可采用的方法是__________；图中④过程中要将含外源基因的ES细胞导人囊胚的__________。将得到的重组胚胎导入⑤体内，其存活的基础是__________。

Answer 1

【答案】细胞体积小、细胞核大、核仁明显 可以增殖而不发生分化 限制酶和DNA连接酶 显微注射法（技术） 细胞代谢必需的 DNA分子杂交 内细胞团 受体子宫对外来胚胎不发生免疫排斥反应

【解析】

基因工程技术的基本步骤：目的基因的获取→基因表达载体的构建（核心）→将目的基因导入受体细胞（将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法）→目的基因的检测与鉴定（包括分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术；个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等）。

动物细胞培养的条件：无菌、无毒的环境；一定的营养物质；温度和PH；气体环境：即95%空气（细胞代谢必需的）和5%的CO2（维持培养液的PH）。

胚胎干细胞简称ES或EK细胞，来源于早期胚胎或原始性腺（即囊胚期的内细胞团）．胚胎干细胞具有胚胎细胞的特性，体积较小，细胞核大，核仁明显；在功能上，具有发育的全能性，可分化为成年动物任何一种组织细胞．另一方面，在体外培养条件下，ES细胞可不断增殖而不发生分化，可进行冷冻保存，也可以进行某些遗传改造。

（1）胚胎干细胞（ES细胞）是由早期胚胎或原始性腺中分离出来的一类细胞，在形态上，表现为细胞体积小、细胞核大、核仁明显；在功能上具有发育的全能性。在体外培养的条件下具有可以增殖而不发生分化的特点。

（2）基因表达载体的构建是基因工程的核心，常常用到的工具酶有限制酶和DNA连接酶。将修饰后的目的基因（绿色荧光蛋白基因）导入动物受体细胞（ES细胞）常采用的方法是显微注射法；动物细胞培养时，需要一定的气体环境（95%的空气和5%的CO2），其中氧气是细胞代谢所必须的，CO2是维持培养液的pH。

（3）为检测ES细胞的染色体上是否含有绿色荧光蛋白基因，在分子水平上可采用的方法是DNA分子杂交法；图中④过程中要将含外源基因的ES细胞导入囊胚的内细胞团，因为只有内细胞团的细胞才发育为后代的组织器官。将得到的重组胚胎导入⑤的子宫内，其存活的基础是受体子宫对外来胚胎不发生免疫排斥反应。