Question

【题目】人乳头状瘤病毒（HPV）与宫颈癌的发生密切相关，抗HPV的单克隆抗体可以准确检测出HPV，从而及时监控宫颈癌的发生，以下是以HPV衣壳蛋白为抗原制备出单克隆抗体的过程，请据图回答：

（1）单克隆抗体制备过程中涉及的细胞工程技术有_____________________________。

（2）若要分析杂交瘤细胞中染色体，可通过解离、漂洗、___、制片等过程制成装片，然后在显微镜下观察。杂交瘤细胞中染色体数目与普通淋巴细胞相比具有的特点是____，在HAT培养基上存活的细胞可能包括____（填下列序号）。

①无抗体分泌的细胞

②抗HPV抗体的分泌细胞

③其它无关抗体的分泌细胞

（3）对于抗体检测呈____性的杂交克隆应尽早进行克隆化，克隆化的方法最常用的是有限稀释法，即稀释细胞到3～10个/mL，每孔加入细胞稀释液____mL（填“0.1”“1”或“10”），使每个孔内不多于一个细胞，达到单克隆培养的目的。

（4）由上述过程生产出的单克隆抗体不能直接用于人体，理由是__________________。

（5）科学家从某些无限增殖细胞的细胞质中分离出了无限增殖调控基因（prG），该基因能激发动物细胞分裂，这为单克隆抗体的制备提供了更多的思路。除本题描述的一种制备单克隆抗体技术外，请再简要写出一种制备单克隆抗体的思路____________。

Answer 1

【答案】动物细胞培养、动物细胞融合 染色 染色体数目加倍 ①②③ 阳 0.1 小鼠形成的抗体对人体来说是抗原，可引起免疫反应 通过基因工程向浆细胞中导入prG，利用核移植技术将浆细胞的细胞核移植到去核的无限增殖细胞中

【解析】

该实验流程为：对小鼠注射特定的抗原蛋白，使小鼠产生免疫反应；得到相应的B淋巴细胞；将小鼠骨髓瘤细胞与B淋巴细胞融合，再用特定的选择培养基进行筛选；在该培养基上，未融合的亲本细胞和融合的具有同种核的细胞都会死亡，只有融合的杂种细胞才能生长（这种杂种细胞的特点是既能迅速大量繁殖又能产生专一的抗体）；对上述杂交瘤细胞还需进行克隆化培养和抗体检测，经多次筛选，就可获得足量的能分泌所需抗体的细胞；最后，将杂交瘤细胞在体外条件下做大规模培养，或注射到小鼠腹腔内增殖，这样，从细胞培养液或小鼠腹水中，就可以提取出大量的单克隆抗体。

（1）单克隆抗体制备过程中要将淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合为杂交瘤细胞，该技术为动物细胞融合技术，要培养杂交瘤细胞，需利用动物细胞培养技术。
（2）观察细胞染色体制片流程：解离、漂洗、染色和制片。因为杂交瘤细胞含有淋巴细胞和骨髓瘤细胞的遗传物质，故杂交瘤细胞中染色体数目与普通淋巴细胞相比具有的特点是染色体数目加倍。看图分析可知：小鼠骨髓瘤细胞不能在HAT培养基上生长，但是没有说能不能生存，只是不能增殖，正常细胞也能在HAT培养基上存活，故①无抗体分泌的细胞、②抗HPV抗体的分泌细胞、③其它无关抗体的分泌细胞都能在HAT培养基上存活，但是能够增殖的只有杂交瘤细胞，故①②③都能存活。
(3)检测后能够产生抗HPV抗体即抗体检测呈阳性的杂交瘤细胞要行克隆化，以便产生单克隆抗体。有限稀释法因为稀释细胞到3～l0个细胞/mL，故每孔加入细胞稀释液0.1 mL，使每个孔内不多于一个细胞，达到单克隆培养的目的。
（4）因为小鼠形成的抗体对人体来说是抗原，存在着排异反应，故由上述过程生产出的单克隆抗体不能直接用于人体。
（5）据题意，可以通过基因工程向浆细胞细胞核染色体DNA中导入prG，提取该浆细胞细胞核，和去核的无限增殖细胞融合为重组细胞，进行细胞培养产生单克隆抗体。