题目内容
【题目】请回答基因工程方面的有关问题:
(1)利用PCR技术扩增目的基因,其原理与细胞内DNA复制类似(如下图所示)。图中引物中为单链DNA片段,它是子链合成延伸的基础。
①从理论上推测,第四轮循环产物中含有引物A的DNA片段所占比例为_________。
②在第_______轮循环产物中开始出现两条脱氧核苷酸链等长的DNA片段,第四轮出现了_______个等长的DNA片段。
(2)设计引物是PCR技术关键步骤之一。某同学设计的两组引物(只标注了部分碱基序列)都不合理(如上图),请分别说明理由。
第一组:____________________________________________________;
第二组:__________________________。
(3)用限制酶EcoRV、MboI单独或联合切割同一种质粒,得到DNA片段长度如下图(1kb即1000个碱基对),请在答题卡的指定位置画出质粒上EcoRV、MboI的切割位点,并标注片段的长度。____________
【答案】 15/16 三 8 引物I和引物II局部发生碱基互补配对而失效 引物I′自身折叠后会出现局部碱基互补配对而失效
【解析】试题分析:采用PCR技术扩增DNA的过程为:变性、退火、延伸。根据PCR过程的特点绘制PCR过程示意图,如图所示:
(1)①由图可知,由原来的每条母链为模板合成的两个新DNA分子中,只含有引物A或引物B,而以新合成的子链为模板合成新DNA分子时,两种引物都含有,故第四轮循环共产生16个DNA分子,其中含有引物A的分子是15个,占15/16。
②由图示可知,第一、二轮循环合成的子链长度均不同,根据半保留复制特点可知,前两轮循环产生的四个DNA分子的两条链均不等长,第三轮循环产生的DNA分子出现两个两条脱氧核苷酸链等长的DNA片段,则四轮出现了8个等长的DNA片段。
(2)第1组:分析图中引物可知,引物Ⅰ和引物Ⅱ的碱基之间存在互补配对关系,这可能会导致引物Ⅰ和引物Ⅱ会发生局部碱基互补配对而失效;第2组:图中引物Ⅰ的两侧碱基具有碱基配对关系,因此引物Ⅰ自身折叠后会出现局部碱基互补配对而失效。
(3)根据图示,该质粒为环形质粒,用限制酶EcoRⅤ单独切割该质粒时,只形成一个片段,说明该质粒上只有1个限制酶EcoRⅤ的识别位点;用限制酶MboⅠ单独切割该质粒时,形成两个片段,说明该质粒上有两个限制酶MboⅠ的识别位点.用限制酶EcoRⅤ和MboⅠ联合切割该质粒时,形成三个片段,其中有一个片段的长度与用MboⅠ单独切割该质粒时产生的片段长度相同(2.5kb),另外的两个片段是5.5kb和6kb,这说明限制酶EcoRⅤ的切割位点存在于用MboⅠ单独切割该质粒时产生的另一片段(11.5kb)上,质粒上EcoRV、MboI的切割位点如图所示:
![](http://thumb2018.1010pic.com/images/loading.gif)