题目内容
【题目】人血清白蛋白(HSA)具有重要的医用价值,传统方法只能从血浆中制备。下图是以基因工程技术获取重组HSA (rHSA)的两条途径。请据图回答:
(1)获取HSA基因,首先需采集人的血液,提取_____合成总cDNA,然后以cDNA为模板,采用PCR技术扩增HSA基因。下图中箭头表示一条引物结合模板的位置及扩增方向,请用箭头在方框内标出标出另一条引物的位置及扩增方向。 __
(2)为了便于HAS基因导入水稻细胞,方框中的“?”一般选用的生物是___,为了提高II过程的导入成功率,通常用_____处理大肠杆菌。
(3)人体合成的初始HSA多肽,需要经过膜系统加工形成正确的空间结构才能具有活性,所以,选择_____途径(填I或II)获取rHSA更有优势。
(4)为了鉴定宿主细胞中是否产生rHSA,可以用_____方法来进行检验。
A.检验HSA基因是否导入 B.检验细胞中是否产生相应的mRNA
C.抗原、抗体杂交 D.检测是否有标记基因
(5)为证明rHSA具有医用价值,需确认rHSA与_____的生物学功能一致。
【答案】总RNA (或mRNA) 农杆菌 氯化钙(Ca2+) I C HSA
【解析】
基因工程技术的基本步骤是:
1、目的基因的获取:方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成。
2、基因表达载体的构建:是基因工程的核心步骤,基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等。
3、将目的基因导入受体细胞:根据受体细胞不同,导入的方法也不一样。将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法;将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法;将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法。
4、目的基因的检测与鉴定:(1)分子水平上的检测:①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术;②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术;③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术。(2)个体水平上的鉴定:抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等。据此答题。
(1)为获取HSA基因,首先需采集人的血液,提取mRNA通过反转录法合成总cDNA,然后以cDNA为模板,采用PCR技术扩增HSA基因。由于DNA两条链是反向平行的,复制时两条子链的延伸也是方向相反,如图中箭头表示一条引物结合模板的位置及扩增方向,则另一条引物位于另一条链的相反一端。另一条引物位置及延伸方向如图所示:。
(2)将目的基因导入受体细胞常利用农杆菌转化法,故方框中的“?”一般选用的生物是农杆菌。将目的基因导入大肠杆菌,常用Ca2+处理大肠杆菌,使之成为感受态。
(3)由于大肠杆菌为原核生物,无生物膜系统,而水稻为真核生物,具有生物膜系统,根据题意:人体合成的初始HSA多肽,需要经过膜系统加工形成正确的空间结构才能具有活性,所以选择I途径(水稻是真核生物,具有生物膜系统,能对初始rHSA多肽进行高效加工)获取rHSA更有优势。
(4)由分析可知,可用抗原-抗体杂交技术检测受体细胞中是否表达出rHSA蛋白,故C符合题意,ABD不符合题意。
(5)为证明rHSA具有医用价值,需对基因工程的产物进行鉴定,即确认rHSA与HSA的生物学功能一致。