题目内容
【题目】图1表示含有目的基因D的DNA片段和部分碱基序列,图2表示一种质粒的结构和部分碱基序列。现有MspI、BamHI、MboI、SmaI 四种限制性核酸内切酶,它们识别的碱基序列和酶切位点分别为:C↓CGGG、G↓GATCC、↓GATC、CCC↓GGG。下列分析中正确的是( )
A.限制酶MspI 和SmaI 的识别序列相同,切割后的产物也相同
B.要把图 2 中质粒和目的基因 D 拼接应选限制酶BamHI 和MboI
C.若用BamHI 切割图 2 质粒,则抗生素 B 抗性基因为标记基因
D.若图 1 用限制酶SmaI 完全切割后会产生 4 种不同的 DNA 片段
【答案】C
【解析】
在基因工程中,限制性内切酶作用对象是磷酸二酯键,能识别DNA中特定的碱基序列并在特定的位置将DNA双链切开成为DNA片段;而DNA连接酶将双链的DNA分子连接,作用对象是磷酸二酯键。
A、限制酶MspI 和SmaI 的识别序列不相同,切割后的末端也不同,切割后产生的产物化学本质相同,但其中的碱基序列不同,A错误;
B、目的基因的两侧是GGATCC序列,该序列是限制酶BamHI的识别序列,因此要把图 2 中质粒和目的基因 D 拼接成重组质粒,应应选限制酶BamHI切割,B错误;
C、若用BamHI 切割图 2 质粒,则抗生素A的抗性基因会被切割,则重组质粒中只能是抗生素 B 抗性基因为标记基因,C正确;
D、图 1中的DNA片段含有两个限制酶SmaI的切割位点,若用限制酶SmaI 完全切割图1中的DNA片段,会产生 3种不同的 DNA 片段,D错误。
故选C。
【题目】利用转基因的工程菌生产药用蛋白,近些年在我国制药行业中异军突起。图1表示基因工程常用的一种质粒。
回答有关问题:
(1)SphⅠ和SacⅠ两种限制酶识别并切割不同的DNA序列,将目的基因和质粒都通过SphⅠ和SacⅠ切割,可以避免_______________。拼接成重组质粒,需要加入_______________酶才能完成。
(2)各限制酶在该质粒上分别只有一处识别序列,有关质粒和重组质粒的限制酶酶切片段长度如下表所示。已知质粒被切除的片段长度为0.5kb,则与质粒结合的目的基因长度为_____
kb。质粒上ClaⅠ与PstⅠ区域之间的长度为2.4kb(图1所示),结合图2分析目的基因上ClaI、PstⅠ两种限制酶的切割位点分别为___________(填“a和b”或“b和a”)。
质粒 | 重组质粒 | |
BglⅡ | 6.0kb | 7.1kb |
ClaⅠ | 6.0kb | 2.3kb, 4.8kb |
PstⅠ | 6.0kb | 1.5kb, 5.6kb |
(3)在筛选导入重组质粒的受体菌时,培养基中加入适量的________________,使导入重组质粒和普通质粒的受体菌都能在该培养基上生长。为了进一步筛选,可以利用抗原-抗体杂交的方法,若出现______________,则该受体菌可以作为工程菌。
(4)若要对药用蛋白的结构进行改造,可利用____________工程对目的基因进行修饰。