酵母菌是一种真菌，与人们的日常生活密切相关，也是现代生物技术研究中常用的模式

生物。果酒、面包的制作需要酵母菌，酵母菌可以用液体培养基(培养液)来培养，培养

液中酵母菌种群的增长情况与发酵食品的制作有密切关系。

(1)土壤中富含各种微生物，将土壤浸出液接种到特定培养基上，可得到酵母菌。这一

过程叫做________；为提高果酒的品质，发酵时常采用人工培养的纯净菌种。实验室

中获取纯净菌种的方法有________。

(2)果汁发酵后是否有酒精产生，可以用________来检验，在酸性条件下，该物质与酒

精反应呈________色。

(3)突变菌往往带有一些特殊的基因。在获得这些基因的过程中，PCR技术相当重要。

PCR扩增反应中加入引物的作用是_________________________________________，

加入DNA聚合酶的作用是_________________________________________________。

(4)酵母细胞固定化可大大提高生产效率。固定酵母细胞时首先需要将干酵母放入

________中活化，若制得的凝胶珠颜色过浅，可能是因为________________________。

酵母菌的线粒体在饥饿和光照等条件下会损伤，线粒体产生的一种外膜蛋白可以引起其发生特异性的“自噬”现象。线粒体外会出现双层膜而成为“自噬体”，与溶酶体结合形成“自噬溶酶体”（如下图）。请作答。

（1）为观察正常细胞中的线粒体，可用           进行染色，被染色的细胞一般         （答“是”或“不是”）处于生活状态。

（2）线粒体内膜结构的基本支架是       ，“自噬溶酶体”形成的过程说明生物膜具有            。

（3）若某酵母菌的线粒体均遭“损伤”，在有氧条件下，葡萄糖氧化分解的终产物是           ，对其检测时，所用试剂是              。

（4）如果人的精子中线粒体基因发生了突变，这种变异一般        （答“能”或“不能”）遗传给后代，理由是                       。

酵母菌和大肠杆菌是实验或发酵工程中常用到的微生物，完成下列有关问题：

（1）科学家发现了物质X能延长酵母菌的寿命，这种物质通过一系列反应激活体内一种称为Sir2的酶，这种酶与延长寿命直接相关。

寿命延长的调节方式属于        的调节，其特点是快速而精细，如果一变异酵母菌只有在培养基中加入物质C和物质X时才能使寿命延长，则说明该变异酵母菌缺少      酶。

（2）氨基酸是酵母菌的      级代谢产物。如果要利用酵母菌大量生产氨基酸，则应采用

      培养法，使酵母菌处于      期；如果要利用酵母菌生产单细胞蛋白质，在产品的分离提纯时应采用      沉淀等方法。

食品工业上常用新鲜苹果榨取果汁，再接种酵母菌来制作高品质果酒，简要流程如下：

（1）为获得纯度较高的菌种，在分离和培养酵母菌时，需要进行无菌操作，其中对培养皿通常用________________灭菌。扩大培养时，使用的培养基是__________（填“固体”或“液体”）培养基，并需要提供___________（填“有氧”或“无氧”）条件。

（2）在果汁中加入适量____________，可以加速苹果汁的出汁速率，缩短操作的时间。

（3）在酸性条件下，可用_______________来检测发酵产物中是否有酒精产生。若要进一步检测所得果酒中活体酵母菌的密度时，一般采用________________________法，但此种方法最终计算得出菌体数目往往比实际的数目低，原因是________________________________________________。

（4）由于封口不严，某瓶果酒放置一段时间后，发现带有明显的酸味，使果酒变酸的主要微生物是_________________。