6.草鱼病毒性出血病是由草鱼呼吸孤病毒(GCRV)引起的,目前尚未找到防治药物.如图是通过基因工程方法将PV7双基因与某质粒连接,并通过草鱼攻毒实验检测免疫保护效果的过程示意图.图中P10和PH为启动子,箭头表示转录方向.PV71和PV72为GCRV外壳蛋白基因(DNA片段).请回答下列问题:

草鱼病毒性出血病核酸疫苗实验鱼的死亡率和免疫保护率记录表
组别疫苗注射量实验鱼数死亡鱼数死亡率免疫保护率
110μg20尾0尾0100%
230μg20尾0尾0100%
360μg20尾1尾5%95%
空载体30μg20尾6尾30%70%
对照020尾20尾100%0
(1)制备草鱼病毒性出血病核酸疫苗,获取大量PV7双基因时可采用PCR技术进行扩增,该技术除需要原料、模板、引物外,还必须用热稳定DNA聚合(或Taq)酶.PCR一般要经历三十次以上的循环,每次循环包括变性、复性和延伸三个阶段,其中变性是指高温(或90-95℃、受热)条件下,DNA分子解旋(为单链)的过程.
(2)使用不同的限制酶切割PV71和PV72基因,是为了防止连接的位置错误,用不同限制酶先后两次切割质粒,是为了防止质粒自身环化,有利于提高核酸疫苗构建的成功率.
(3)攻毒实验检测是指将不同浓度的核酸疫苗导入草鱼体内,通过转录和翻译产生草鱼呼肠孤病毒外壳蛋白,使草鱼生成抗体和记忆细胞,同时给草鱼注入相同浓度的GCRV,我,统计草鱼免疫保护率,实验结果说明核酸疫苗起到了保护草鱼、预防草鱼病毒性出血病的作用.导入空载体(普通质粒)的草鱼免疫保护率达到70%,但草鱼体内并未检测到抗体水平的明显增加,可能的原因是导入草鱼体内的空载体(普通质粒)能提高草鱼的非特异性免疫能力.核酸疫苗注射后,科学家发现PV7双基因在启动子的驱动下持续表达,至第49天核酸疫苗仍没有被降解,仍能检测到PV7双基因的转录.综上所述,与常规基因工程生产的蛋白质疫苗相比,核酸疫苗所具备的优点有抗原性强、保护时间长、安全性好、制备和运输方便.
5.土壤中含有大量的难溶性磷酸盐,为了从土壤中筛选出能够将难溶性磷酸盐转化为能被植物吸收的可溶性磷的优良解磷菌株,科研人员进行了如下实验:
实验原理:固体培养基中难溶性磷酸盐在微生物的作用下溶解,会在菌落周围形成透明圈(如图2),透明圈直径(D)与菌落直径(d)的比值(D/d)代表微生物溶解磷的能力大小.

实验步骤:
步骤1:取某地区土样10g制得土壤溶液并进行一定浓度梯度的稀释,取稀释液1mL接种到基础培养基A上,在适宜温度下培养72h.
步骤2:在基础培养基A上用接种环挑取代表性菌落再次接种,培养3~4d后观察菌落的特征和透明圈的大小,初步筛选出三种优良解磷菌株(如表).
菌株透明圈直径(D)菌落直径(d)D/d
M-3-0118.812.31.5
B3-5-620.78.02.6
T1-4-019.16.51.4
(1)步骤1采用的是稀释涂布平板法分离解磷菌株;在统计菌落数目时,需按照菌落计数的要求计数,图1中应选择105倍稀释度的菌液计数,结果才准确可靠.据图可得出每克土样中解磷菌株的活菌数为3.6×l06
(2)图2中,依次进行的划线的四个区域的面积要求为A<B<C<D,D区面积最大的原因是使该区出现大量的单个菌落以便挑选纯化(或便于菌种分散),注意D区划线,不要与A(或A、B)(填字母)区相连.
(3)为了筛选出所需菌株,培养基中唯一的磷源应该是难溶性磷酸盐.培养基上出现的单一菌落可以看作一个种群(填“种群”“群落”或“生态系统”.)根据实验结果可以确定熔解磷能力最强的菌株是B3-5-6.
 0  126884  126892  126898  126902  126908  126910  126914  126920  126922  126928  126934  126938  126940  126944  126950  126952  126958  126962  126964  126968  126970  126974  126976  126978  126979  126980  126982  126983  126984  126986  126988  126992  126994  126998  127000  127004  127010  127012  127018  127022  127024  127028  127034  127040  127042  127048  127052  127054  127060  127064  127070  127078  170175 

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