Question

17．我市葡萄种植基地为解决葡萄滞销易腐烂问题，引进果酒、果醋生产线进行葡萄的深加工，获得了较好效益，其生产流程如图所示，据图回答：

（1）在筛选菌种A时，需要在接种前用高压蒸汽灭菌法对葡萄果汁进行灭菌．对于需要长期保存的菌种，可以采用甘油管藏的方法．
（2）在纯化菌种A时接种了5个平板，每个平板均接种了0.1mL样品并培养．其中乙平板的菌落分布如图，纯化菌种A的接种方法是稀释涂布平板法，推测出现平板乙可能的操作失误是涂布不均匀．其余的甲、丙、丁、戊平板的菌落数分别是180、220、480、200，则样品中菌种A的数量为2000个/mL，用该方法统计的结果，一般低于（低于、高于）实际值．
（3）如图所示，候选菌B是醋酸（杆）菌菌，接种后发酵条件与果酒发酵不同之处是升高温度（至30-35℃）和通入无菌氧气．
（4）与微生物培养基相比，植物组织培养的培养基常需添加生长素和细胞分裂素，植物组织培养技术的关键步骤是脱分化和再分化．

Answer 1

分析 1、微生物的实验室培养常用的灭菌方法有高压蒸汽灭菌、干热灭菌及灼烧灭菌．
2、微生物接种常用的方法有平板划线法和稀释涂布平板法，后者常用来统计活菌数，但统计的数目往往比实际值低，因为当两个或多个细菌连在一起时，往往统计的是一个菌落．
3、对于频繁使用的菌种常采用斜面保藏法，对于需要长期保存的菌种可以采用甘油管藏的方法．
4、分析题图：图示表示两种微生物的筛选、分离、纯化的过程及果酒和果醋的制作过程，其中候选菌A是酵母菌，候选菌B是醋酸（杆）菌．

解答 解：（1）葡萄果汁作为筛选菌种A时的培养基需要在接种前用高压蒸汽灭菌进行灭菌；需要长期保存的菌种，可以采用甘油管藏法．
（2）分析图乙中培养基培养结果，可以推知采用的纯化方法是稀释涂布平板法；平板乙中的菌落分布很不均匀，可能的操作失误是涂布不均匀导致的；菌落数在30～300的平板适于计数（菌落数是480的丁平板应舍弃），可计算样品中菌种A的数量=（180+220+200）÷3÷0.1=2000 个/mL，由于稀释涂布平板法的个别菌落可能来自于两个和多个细胞，所以用该方法统计的结果，一般低于实际值．
（3）由以上分析知，候选菌B是醋酸（杆）菌，与果酒发酵时的酵母菌不同，醋酸菌是嗜温、好氧菌，所以接种醋酸菌后发酵条件与果酒发酵不同之处是：升高温度（至30-35℃）和通入无菌氧气．
（4）植物组织培养时，离体的植物组织和细胞，对营养、环境等条件的要求相对特殊，需要配置特殊的培养基，培养基中通常需要添加生长素和细胞分裂素，脱分化和再分化是植物组织培养技术的关键步骤．
故答案为：
（1）高压蒸汽灭菌      甘油管藏
（2）稀释涂布平板法    涂布不均匀   2000   低于
（3）醋酸（杆）菌     升高温度（至30-35℃）      通入无菌氧气
（4）生长素    细胞分裂素    脱分化     再分化

点评 本题结合果酒、果醋生产流程图，考查微生物的筛选、分离和计数，果酒、果醋的制作，植物组织培养的知识，意在考查考生对所学知识的理解，把握知识间的内在联系的能力．