Question

6．请根据现代生物工程技术回答下列问题：
（1）基因工程技术中对已获得的目的基因，常采用PCR技术大量扩增．该技术的基本过程是：目的基因DNA受热变性后解链为单链，引物与单链相应互补序列结合，然后在DNA聚合酶的作用下进行互补链的合成（或延伸）（或子链的合成），如此重复循环多次．
（2）限制酶Smal能识别如图，并在图中箭头位置切断DNA．

用限制酶Smal切割获取的目的基因需用T₄DNA连接酶构建基因表达载体．
（3）培育转基因小鼠除利用基因工程技术之外还需用到早期胚胎培养、胚胎移植等技术．
（4）制备单克隆抗体通常选用细胞融合技术，使（经抗原刺激）B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合，融合成功的细胞经过筛选就是所需要的杂交瘤细胞．

Answer 1

分析 1、PCR技术扩增目的基因的过程是：目的基因DNA受热变性后解链为单链，引物与单链相应互补序列结合，然后在热稳定性DNA聚合酶（Taq酶）作用下进行延伸，如此重复循环多次，使目的基因的量呈指数（2ⁿ）增长．
2、构建基因表达载体时，用限制酶切割DNA后可能产生黏性末端，也可能产生平末端；平末端需用T₄DNA连接酶将双链DNA片段“缝合”起来．“缝合”的过程，就是恢复被限制酶切开的两个脱氧核苷酸之间的磷酸二酯键的过程．

解答 解：（1）PCR技术扩增目的基因的过程是：目的基因DNA受热变性后解链为单链，引物与单链相应互补序列结合，然后在热稳定性DNA聚合酶（Taq酶）作用下进行延伸，如此重复循环多次，使目的基因的量呈指数（2ⁿ）增长．
（2）如图，限制酶Smal在图中箭头位置切断DNA，获取平口末端．构建基因表达载体时，用限制酶切割DNA后可能产生黏性末端，也可能产生平末端；平末端需用T₄DNA连接酶将双链DNA片段“缝合”起来．
（3）培育转基因小鼠过程涉及到的技术有：基因工程、胚胎培养、胚胎移植．
（4）制备单克隆抗体时，将具有免疫能力的B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合，融合成功的细胞经过筛选，获取能大量繁殖并能产生专一抗体的杂交瘤细胞．
故答案为：
（1）引物   互补链的合成（或延伸）  （或子链的合成）
（2）T₄DNA连接
（3）早期胚胎培养  胚胎移植
（4）（经抗原刺激）B淋巴   骨髓瘤    杂交瘤

点评 本题考查基因工程的相关知识，要求考生识记基因工程的原理及操作步骤，掌握各操作步骤中需要注意的细节问题；本题还结合利用胚胎干细胞培育转基因小鼠，该过程涉及到基因工程、早期胚胎培养、胚胎移植各技术．