Question

8．绿色荧光蛋白（GFP）是一种在紫外光下能发出绿色荧光的蛋白，存在于一种水母体内，这种蛋白是由绿色荧光蛋白基因控制合成的．我国科学家将绿色荧光蛋白（GFP）基因转移到猪细胞中，并培育成克隆猪，过程如下．请据图回答．

（1）-般来说，图中过程②需要用同种限制酶切割荧光蛋白基因和质粒．但在实际操作中切
割荧光蛋白基因是利用酶Ⅰ（识别序列和切点是-G^↓GATCC-），切割质粒是利用酶Ⅱ（识别序列和切点是-^↓GATC-）．这样获得的目的基因和质粒的黏性末端能否在DNA连接酶的作用下连接起来？能，理由是这两种酶切割形成的黏性末端是相同的．
（2）过程③将重组质粒导入猪胎儿成纤维细胞时，最常采用的方法是显微注射法．
（3）上述过程中需将猪胎儿成纤维细胞核导入到去核的卵母细胞中，这个技术叫动物细胞核移植．不直接利用猪胎儿成纤维细胞培育成胚胎的原因是猪胎儿成纤维细胞不具有全能性．
（4）可植入受体母猪的早期胚胎是指囊胚期或桑椹胚期（时期）的胚胎．在将早期胚胎导人受体母猪前，需对供体母猪和受体母猪进行同情发情处理．

Answer 1

分析 分析题图：图1为我国首例绿色荧光蛋白（GFP）转基因克隆猪的培育过程示意图，其中①表示获取目的基因（绿色．荧光蛋白基因）的过程；②表示基因表达载体的构建过程；③表示将目的基因导入受体细胞．此外还采用了核移植、早期胚胎培养、胚胎移植等技术．

解答 解：（1）②是基因表达载体的构建过程，该过程中首先需要用同种限制酶切割荧光蛋白基因和质粒，以产生相同的黏性末端．酶Ⅰ（识别序列和切点是-G^↓GATCC-）和酶Ⅱ（识别序列和切点是-^↓GATC-）的识别序列不同，但两者切割后形成的黏性末端相同，因此用这两种酶切割获得的目的基因和质粒的黏性末端能在DNA连接酶的作用下连接起来．
（2）将重组质粒导入动物细胞常用显微注射法．
（3）将猪胎儿成纤维细胞核导入到去核的卵母细胞中的技术叫动物细胞核移植．猪胎儿成纤维细胞不具有全能性，因此不能直接将猪胎儿成纤维细胞培育成胚胎．
（4）胚胎移植时，应该选择桑椹胚或囊胚期的胚胎进行．为保证胚胎移植到相同的生理环境，在胚胎移植时，需对供体母猪和受体母猪进行同情发情处理．
故答案为：
（1）限制酶     能     这两种酶切割形成的黏性末端是相同的
（2）显微注射法
（3）动物细胞核移植    猪胎儿成纤维细胞不具有全能性
（4）囊胚期或桑椹胚期    同情发情

点评 本题结合我国首例绿色荧光蛋白（GFP）转基因克隆猪的培育过程示意图，考查基因工程的原理及技术、核移植技术及胚胎工程技术，重点考查基因工程的相关知识，要求考生识记基因工程的原理、工具及操作过程，能准确判断图中各步骤的名称及采用的生物技术．