题目内容

16．某一质粒载体如图所示，外源DNA插入到Ampr或Tetr中会导致相应的基因失活（Ampr表示氨苄青霉素抗性基因，Tetr表示四环素抗性基因）．有人将此质粒载体用BamHI酶切后，与用BamHI酶切获得的目的基因混合，加入DNA连接酶进行连接反应，用得到的混合物直接转化大肠杆菌，结果大肠杆菌有的未被转化，有的被转化．被转化的大肠杆菌有三种，分别是含有环状目的基因、含有质粒载体、含有插入了目的基因的重组质粒的大肠杆菌．回答下列问题：
（1）基因工程中，某些噬菌体经改造后可以作为载体，其DNA复制所需的原料来自于受体细胞
（2）质粒载体作为基因工程的工具，应具备的基本条件有能自我复制、具有标记基因、具有一至多个限制酶切位点（答出两点即可）．
（3）如果用含有氨苄青霉素的培养基进行筛选，在培养基上能生长的细胞是含有质粒载体和含插入了目的基因的重组质粒的细胞．在上述筛选的基础上，若要筛选含有插入了目的基因的重组质粒的大肠杆菌的单菌落，还需使用含有是四环素的固体培养基．

分析 运载体：
（1）常用的运载体：质粒、噬菌体的衍生物、动植物病毒．（质粒是一种裸露的、结构简单、独立于细菌拟核DNA之外并具有自我复制能力的双链环状DNA分子．）
（2）作为运载体必须具备的条件：①要具有限制酶的切割位点； ②要有标记基因（如抗性基因），以便于重组后重组子的筛选③能在宿主细胞中稳定存在并复制；④是安全的，对受体细胞无害，而且要易从供体细胞分离出来．
（3）天然的质粒不能直接作为载体，基因工程中用到的质粒都是在天然质粒的基础上进行过人工改造的．

解答 解：（1）噬菌体属于病毒，病毒没有细胞结构，其DNA复制所需的原料来自于受体细胞．
（2）质粒载体作为基因工程的工具，应具备的基本条件有具有标记基因、具有一个或多个限制酶切点、能在受体细胞中复制并稳定保存．
由于未被转化的和仅含有环状目的基因的大肠杆菌中不含有氨苄青霉素抗性基因，因此如果用含有氨苄青霉素的培养基进行筛选，未被转化的和仅含有环状目的基因的（3）质粒载体用BamHI酶切后，四环素抗性基因被破坏，但氨苄青霉素抗性基因完好，因此如果用含有氨苄青霉素的培养基进行筛选，在培养基上能生长的细胞是含有质粒载体和含插入了目的基因的重组质粒的细胞．在上述筛选的基础上，若要筛选含有插入了目的基因的重组质粒的大肠杆菌的单菌落，还需使用含有四环素的固体培养基，即含有重组质粒的大肠杆菌在其中不能生长，而含有普通质粒的大肠杆菌能生长．
故答案为：
（1）受体细胞
（2）能自我复制、具有标记基因、具有一至多个限制酶切位点
（3）含有质粒载体      含插入了目的基因的重组质粒        四环素

点评 本题考查了基因工程的有关知识，要求考生能够识记质粒作为运载体的条件，掌握目的基因检测和鉴定的方法，再结合题干信息准确分析．

练习册系列答案
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