Question

2．如图为质粒限制酶酶切图谱．图中限制酶的识别序列及切割形成的黏性末端均不相同．若加入目的基因需用的限制酶是（　　）

• A． HindIII和XbaI
• B． BamHI或NdeI
• C． EcoRI或BamH I
• D． PstI 或KpmI

Answer 1

分析 1、基因表达载体的构建：
（1）目的：使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传至下一代，使目的基因能够表达和发挥作用．
（2）组成：目的基因+启动子+终止子+标记基因
①启动子：是一段有特殊结构的DNA片段，位于基因的首端，是RNA聚合酶识别和结合的部位，能驱动基因转录出mRNA，最终获得所需的蛋白质．
②终止子：也是一段有特殊结构的DNA片段，位于基因的尾端，终止子的作用是使转录在所需要的地方停止．
③标记基因的作用：是为了鉴定受体细胞中是否含有目的基因，从而将含有目的基因的细胞筛选出来．常用的标记基因是抗生素抗性基因．
2、目的基因插入的位置位于启动子与终止子之间，从图中看出位于启动子与终止子之间的酶有NdeI、XbaI、BamHI，XbaI的切割位点有2个，所以用XbaI切割会切掉终止子．

解答 解：A、HindIII会破坏启动子，A错误；
B、BamHI或NdeI切割的位点位于启动子和终止子之间，B正确；
C、EcoRI会破坏终止子，C错误；
D、PstI 会破坏标记基因，KpmI会破坏复制原点，并且两种酶的切割位点不位于启动子和终止子之间，D错误．
故选：B．

点评 导入目的基因后，需要在受体细胞内转录，所以导入的目的基因应该位于启动子和终止子之间，并且需要限制酶不能破坏启动子、终止子和标记基因等．