Question

15．如图是利用羊来生产人抗凝血酶（AT）的基本流程．图中amp^R表示氨苄青霉素抗性基因，如tet^R表示四环素抗性基因，BamHⅠ、HindⅢ、SmaⅠ为三种限制酶及酶切位点．据图回答问题：

（1）通过逆转录人工合成的AT基因无（填“有”或“无”）内含子，可采用PCR（多聚酶链式反应）技术来扩增获得的AT基因．
（2）图中将人AT基因插入到质粒前，需要用HindⅢ和BamHI限制酶同时切割载体和含AT基因的片段，筛选含有重组质粒的大肠杆菌首先需要在含氨苄青霉素的培养基上进行．
（3）重组质粒上启动子的功能是驱动目的基因转录．过程①可采用显微注射的方法将重组质粒导入羊受精卵中，羊的早期胚胎发育至桑椹胚或囊胚阶段后通过过程②移植到代孕羊体内．
（4）可采用抗原一抗体杂交技术从分子水平来检测AT基因是否表达成功．

Answer 1

分析 基因工程技术的基本步骤：
（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成．
（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等．
（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样．将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法．
（4）目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术．个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等．

解答 解：（1）真核生物基因的编码区包含外显子和内含子，但是翻译的模板mRNA只是由外显子转录而来，因此通过逆转录人工合成的AT基因没有内含子，可采用PCR（多聚酶链式反应）技术来扩增获得的AT基因．
（2）由于质粒中只含有两种限制酶切点，因此图中将人AT基因插入到质粒前，需要用HindⅢ和BamHI限制酶同时切割载体和含AT基因的片段；质粒中氨苄青霉素抗性基因作为标记基因，用于检测目的基因是否导入受体细胞，因此筛选含有重组质粒的大肠杆菌首先需要在含氨苄青霉素的培养基上进行．
（3）重组质粒上启动子的功能是驱动目的基因转录．过程①可采用显微注射的方法将重组质粒导入羊受精卵中，羊的早期胚胎发育至桑椹胚或囊胚阶段后通过过程②移植到代孕羊体内．
（4）可采用抗原一抗体杂交技术从分子水平来检测AT基因是否表达成功．
故答案为：
（1）无      PCR（多聚酶链式反应）
（2）HindⅢ和BamH I        氨苄青霉素
（3）驱动目的基因转录     显微注射      桑椹胚或囊胚
（4）抗原一抗体杂交

点评 本题难度适中，属于考纲中识记、理解层次的要求，着重考查了基因工程的步骤、目的基因导入动物细胞的方法等相关知识，要求考生具有一定的识图能力，并能识记相关基础知识．