Question

17．家蚕细胞具有高效表达外源基因能力．将人干扰素基因导入家蚕细胞并大规模培养，可以提取干扰素用于制药．下列说法不正确的是（　　）

• A． 家蚕细胞培养所需二氧化碳的主要作用是维持培养液的pH
• B． 来自cDNA文库的干扰素基因片段必须插入表达载体的启动子和终止子之间
• C． 采用PCR技术扩增干扰素基因的实验中是以干扰素基因为模板
• D． 进行转基因操作前，需用纤维素酶短时处理幼蚕组织，以便获得单个细胞

Answer 1

分析 1、基因工程技术的基本步骤：
（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成．
（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等．
（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样．将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法．
（4）目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术．个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等．
2、动物细胞培养过程：取动物组织块→剪碎组织→用胰蛋白酶处理分散成单个细胞→制成细胞悬液→转入培养液中（原代培养）→放入二氧化碳培养箱培养→贴满瓶壁的细胞用酶分散为单个细胞，制成细胞悬液→转入培养液（传代培养）→放入二氧化碳培养箱培养．
3、动物细胞培养条件：
（1）无菌、无毒的环境：①消毒、灭菌；②添加一定量的抗生素；③定期更换培养液，以清除代谢废物．
（2）营养物质：糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素等，还需加入血清、血浆等天然物质．
（3）温度和PH：36.5℃±0.5℃；适宜的pH：7.2～7.4．
（4）气体环境：95%空气（细胞代谢必需的）和5%的CO₂（维持培养液的PH）．

解答 解：A、家蚕细胞培养所需二氧化碳的主要作用是维持培养液的pH，A正确；
B、来自cDNA文库的干扰素基因片段必须插入表达载体的启动子和终止子之间，这样才能使目的基因正常表达，B正确；
C、采用PCR技术扩增干扰素基因的实验中是以干扰素基因（目的基因）为模板，C正确；
D、进行转基因操作前，需用胰蛋白酶短时处理幼蚕组织，以便获得单个细胞，D错误．
故选：D．

点评 本题考查基因工程和动物细胞工程的相关知识，要求考生识记基因工程的原理及操作步骤，掌握各操作中需要注意的细节；识记动物细胞培养的过程，掌握动物细胞培养的条件，能结合所学的知识准确判断各选项．