Question

15．“创卫”是创建卫生城市的简称．“卫生城市”是一个城市综合功能和文明程度的重要标志．某同学欲利用所学习的微生物培养知识，通过实验证明痰液中含有细菌，来倡导同学们不要随地吐痰，为“创卫”添一份力．请回答下列问题：
（1）欲培养细菌必须先制备可供细菌生长的培养基．实验室中常用牛肉膏蛋白胨固体培养基来培养微生物，该培养基的组成成分包括牛肉膏、蛋白胨、NaCl、琼脂、H₂O等；该培养基中微生物所需的氮源来自牛肉膏、蛋白胨，制备该培养基的步骤是：计算-称量-溶化-灭菌-倒平板，其中灭菌常用的方法是高压蒸汽灭菌法；培养基灭菌后，需要冷却到50℃左右才能倒平板，等平板冷凝后，还需要将平板倒置，主要目的是防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染
（2）为了使实验更有说服力，某同学设置空白对照组和若干实验组，其中对照组的作用是排除实验组中非测试因素对实验结果的影响．若在某次调查中，某一实验组平板上的平均菌落数为39个，而空白对照组的平板上出现19个菌落，这种结果说明在此次调查中出现了污染现象．
（3）某同学利用稀释涂布平板法来统计样品中细菌的数目，统计结果往往比实际细菌的数目要低，主要原因是：当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落．

Answer 1

分析 1、培养基的营养构成
①各种培养基的具体配方不同，但一般都含有水、碳源、氮源和无机盐；
②不同培养基还要满足不同微生物对pH、特殊营养物质以及氧气的要求．
2、配制牛肉膏蛋白胨固体培养基的注意事项
①倒平板的温 度一般50℃左右适宜，温度过高会烫手，过低培养基又会凝固；
②平板需倒置，这样既可使培养基表面的水分更好地挥发，又可防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染．

解答 解：（1）配制固体培养基时，需加入凝固剂，常用的凝固剂是琼脂．对培养基灭菌常用的方法是高压
蒸汽灭菌法．倒平板的温度通常要冷却到50℃左右．由丁平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，应将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染．
（2）设置对照的主要目的是排除实验组中非测试凶素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度．在操作正 确的情况下，空白对照组中不应出现菌落，若出现菌落，则说明操作过程中存在微生物污染．
（3）由于稀释涂布平板法统计的是菌落数，以此来代表细菌数，因此只能统计活菌数，不能统计死菌；又因为 当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落，因此此方法统计的结果比实际数要小．
故答案为：
（1）琼脂    牛肉膏、蛋白胨    高压蒸汽灭菌法     50     防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染
（2）排除实验组中非测试因素对实验结果的影响（答案合理即可给分）  污染
（3）当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落

点评 本题考查微生物的分离和培养，要求考生识记培养基的成分、种类及功能；掌握接种微生物常用的两种方法，尤其是划线分离操作中需要注意的有关问题，能结合所学的知识准确答题，属于考纲识记和理解层次的考查．