Question

20．为验证某种中药牙膏是否像其广告宣传的一样具有较强的抑菌功效，老师带领生物兴趣小组的同学设计了如下实验（实验过程符合无菌操作要求）：
①用无菌水漱口，向漱口液中加入适量的该中药牙膏；
②配制牛肉膏蛋自胨固体培养基；
③将上述样品接种到培养基上，在适宜条件下进行培养；
④一段时间后，对培养结果进行观察并进行菌落计数．
请分析上述实验过程并回答下列问题：
（1）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的一般步骤是：计算、称量、溶化、灭菌、倒平板；培养基中牛肉膏的作用主要是为微生物生长提供碳源、磷酸盐、维生素、氮源等营养物质；培养基灭菌常用的方法是高压蒸气灭菌．
（2）如何证明所用培养基已经彻底灭菌？对未接种的培养基进行培养，如无菌落出现，则证明培养基灭菌彻底．
（3）本实验样品接种时最好采用稀释涂布平板方法．培养一段时间后，培养基表面长出菌落，每一个标准菌落来源于样品中的一个活菌．
（4）请指出本实验设计中的一个明显的错误，并加以改正．没有设置对照实验．应将漱口液分为两份，一份加牙膏，一份不加牙膏分别接种培养．

Answer 1

分析 制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的一般步骤是：计算、称量、溶化、灭菌、倒平板．培养基的灭菌一般采用高压蒸汽灭菌，接种的方法一般有平板划线法和稀释涂布平板法．
本实验还应该设置对照实验，应将漱口液分为两份，一份加牙膏，一份不加牙膏分别接种培养，还要对未接种的培养基进行培养，如无菌落出现，则证明培养基灭菌彻底．

解答 解：（1）制备牛肉青蛋白胨固体培养基的一般步骤是：计算、称量、溶化、灭菌、倒平板．牛肉膏可以提供碳源、磷酸盐、维生素、氮源等．培养基在分装前往往要进行高压蒸汽灭菌．
（2）证明所用培养基是否彻底灭菌，应该对未接种的培养基进行空白培养，如无菌落出现，则证明培养基灭菌彻底．
（2）因为此样品用固体培养基接种且培养一段时间后，培养基表面长出菌落，所以接种最好采用稀释涂布平板法；菌落是由单个细菌（或其他微生物）细胞或一堆同种细胞在适宜固体培养基表面或内部生长繁殖到一定程度，形成肉眼可见的子细胞种群．
（4）本实验设计中的一个明显错误是没有设置对照实验，应将漱口液分为两份，一份加牙膏，一份不加牙膏分别接种培养．
故答案为：
（1）溶化     倒平板      碳源、磷酸盐、维生素、氮源      高压蒸气灭菌
（2）对未接种的培养基进行培养，如无菌落出现，则证明培养基灭菌彻底
（3）稀释涂布平板     一个活菌
（4）没有设置对照实验．应将漱口液分为两份，一份加牙膏，一份不加牙膏分别接种培养

点评 本题以中药牙膏为素材，考查微生物培养及实验设计的相关知识，要求考生识记培养基的制备步骤、培养基的成分及灭菌方法和接种方法；要求考生掌握实验设计的原则，特别是对照原则和单一变量原则，能对实验进行完善．