题目内容
【题目】人体内的t-PA蛋白能高效降解由纤维蛋白凝聚而成的血栓，是心梗和脑血栓的急救药。然而，为心梗患者注射大剂量的基因工程t-PA会诱发颅内出血，其原因在于t-PA与纤维蛋白结合的特异性不高。研究证实，将t-PA第84位的半胱氨酸换成丝氨酸，能显著降低出血副作用。据此，先对天然的t-PA基因进行序列改造，然后再采取传统的基因工程方法表达该改造后的基因，可制造出性能优异的改良t-PA蛋白。（注：下图表示相关的目的基因、载体及限制酶。pCLY11为质粒，新霉素为抗生素。）
回答下列问题：
（1）己知人t-PA基因第84位半胱氨酸的模板链碱基序列为ACA，而丝氨酸的密码子为UCU，因此改造后的基因决定第84位丝氨酸的模板链的碱基序列应设计为____。
（2）若t-PA改良基因的粘性末端如图所示，那么需选用限制酶____和____切开质粒pCLY11，才能与t-PA改良基因高效连接，在连接时需要用到 ___酶。
（3）应选择____（能／不能）在加入新霉素的培养基中生存并形成菌落的大肠杆菌作为受体细胞，目的是____。在加入新霉素的培养基中形成菌落的受体细胞并非都是目的菌株，需选择呈____色的菌落，进一步培养、检测和鉴定，以选育出能生产改良t-PA蛋白的工程菌株。
（4）以上制造性能优异的改良t-PA蛋白的过程称为____工程。
【答案】AGA XmɑⅠ BglⅡ DNA连接酶 不能 以便筛选出导入质粒pCLY1I的大肠杆菌 白 蛋白质
【解析】
基因工程的基本操作步骤：获取目的基因→构建基因表达载体→导入受体细胞→得到转基因生物→目的基因检测与鉴定。蛋白质工程可以通过基因修饰或基因合成，对现有的蛋白质进行改造，或制造新的蛋白质，以满足人类的生产和生活的需求。
（1）根据碱基互补配对的原则，丝氨酸的密码子为UCU，则其编码序列为TCT，所以模板链的碱基序列为AGA。
（2）若要质粒pCLY11与t-PA突变基因高效连接，需质粒和突变基因切割后产生黏性末端能碱基互补配对，t-PA突变基因切割后的黏性末端分别为：-GGCC和-CTAG，故质粒pCLY11需要用XmaI和Bg/II切割，连接时需要应DNA连接酶。
（3）由于质粒上以新霉素抗性基因作为标记基因，所以选择不能再加入新霉素的培养基中生存并形成菌落的大肠杆菌作为受体细胞，以便筛选出导入质粒pCLY1I的大肠杆菌。重组质粒的mlacZ序列被破坏，表达产物使细胞呈白色，故在加入新霉素的培养基中形成菌落的受体细胞需选择呈白色的菌落，进一步培养、检测和鉴定，以选育出能生产改良t-PA蛋白的工程菌株。
（4）通过对基因的改造实现对蛋白质的改造，称为蛋白质工程。
