Question

2．柴油是重要的燃料油之一，也因泄漏与不当排放等造成了严重的环境污染．科研人员从遭受柴油污染的土壤样品中取土样5g，加入含100mL培养基M的锥形瓶中，在30℃条件下振荡培养5d，取出5mL培养液接种到相同的新鲜培养基，按此步骤，连续培养5次，分离获得醋酸钙不动杆菌DB（一种柴油降解菌）．利用该菌，科研人员进一步探索其降解柴油的最佳条件，获得实验结果如图．请回答下列问题．

（1）为获得醋酸钙不动杆菌DB，培养基M应以柴油为唯一碳源，还要考虑无机盐的种类和比例．
（2）在实验过程中，科研人员“30℃条件下振荡培养5d，取出5mL培养液接种到相同的新鲜培养基，按此步骤，连续培养5次的主要目的是使醋酸钙不动杆菌DB的数量增加（或“使柴油分解菌富集”）．
（3）在分离醋酸钙不动杆菌DB操作时，在严格无菌条件下，采用平板划线法（填接种方法）在制备好的牛肉膏蛋白胨培养基上进行接种，接种完，对接种环进行灼烧灭菌处理．培养一阶段后，观察、挑取平板上形态、颜色、大小和隆起程度等一致的菌落进行重复培养，直到分离出单一菌株．
（4）据图分析，若某地区土壤发生柴油重度污染时，则可以（对被柴油重度污染的土壤进行稀释）使柴油浓度降低至4000mg•kg^-1左右，并添加浓度为6mg•g^-1的表面活性剂，以有利于提高对柴油的降解效果．

Answer 1

分析 分析图1：随着柴油添加量的增加，柴油的降解率呈先增加后下降的趋势，即在4000mg．kg^-1左右柴油的降解率最高．
分析图2：随着表面活性剂的浓度的上升，柴油的降解率呈不断增加的趋势，图中表面活性剂的浓度为6mg．g^-1左右时降解率最高．

解答 解：（1）分析题意可知，醋酸钙不动杆菌DB是一种柴油降解菌，因此为获得醋酸钙不动杆菌DB，培养基M应以柴油为唯一碳源，还要考虑无机盐的种类和比例．
（2）在实验过程中，科研人员“30℃条件下震荡培养5天，取出5mL培养液接种到相同的新鲜培养基，按此步骤，连续培养5次”的主要目的是使醋酸钙不动杆菌DB的数量增加（或使柴油分解菌富集）．
（3）在分离醋酸钙不动杆菌DB操作时，在严格无菌条件下，采用平板划线法或稀释涂布平板法在制备好的牛肉膏蛋白胨培养基上进行接种，接种完，对接种环进行灼烧灭菌处理．培养一段时间后，观察、挑取平板上形态、颜色、大小和隆起度等一致的菌落进行重复培养，直到分离出单一菌株．
（4）根据柱形图结果可知，在柴油添加量为4000mg．kg^-1左右柴油的降解率最高，表面活性剂的浓度为6mg．g^-1时降解率最高，因此若某地区土壤发生柴油重度污染时，则可以将对被柴油重度污染的土壤进行稀释，使柴油浓度降低至4000mg．kg^-1左右，并添加浓度为6mg．g^-1的表面活性剂，以有利于提高对柴油的降解效果．
故答案为：
（1）柴油     种类
（2）使醋酸钙不动杆菌DB的数量增加（或“使柴油分解菌富集”）
（3）平板划线法   灼烧     菌落
（4）（对被柴油重度污染的土壤进行稀释）使柴油浓度降低至4 000 mg•kg^-1左右         6 mg•g^-1

点评 本题考查了微生物分离和纯化的有关知识，要求考生掌握选择培养基在分离微生物的实验过程中的运用，识记纯化微生物的接种方法，能够根据柱形图中的信息提出有效的降解柴油污染的措施．