题目内容

5．为了提高乙肝疫苗的预防效果，科学家们对于该疫苗的研发过程做如下的改进：提取乙肝病毒（HBV）基因重组后，与β-半乳糖苷酶基因结合，形成重组质粒BPT（如图 1），随后的操作如图2，请回答下列问题：

（1）在图一中B（A/B）插入终止子．启动子是与RNA聚合酶识别和结合的位点，控制转录的开始．
（2）从大肠杆菌中提取融合蛋白P-BPT仍需进一步修饰、纯化．其主要原因是因为大肠杆菌不具备内质网、高尔基体（细胞器）．
（3）实验中抽取小鼠脾的淋巴细胞进行细胞培养，培养基的pH控制在7.2-7.4．从分子水平上使用抗原-抗体杂交方法对特异性免疫应答结果进行检测．

分析 DNA重组技术至少需要三种工具：限制性核酸内切酶（限制酶）、DNA连接酶、运载体．
目的基因的检测与鉴定：探针--用放射性同位素（或荧光分子）标记的含有目的基因DNA片段．
1．分子水平上的检测：
①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术
②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术
③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术
2．个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等．

解答 解：（1）根据题意可知，提取乙肝病毒（HBV）基因重组后，与β-半乳糖苷酶基因结合，启动子在组合基因的首端，控制基因转录的开始，终止子在组合基因的末端，即插入B点，从而终止基因的转录．
（2）真核细胞中，分泌蛋白的合成与分泌过程：核糖体合成蛋白质→内质网进行粗加工→高尔基体进行再加工→细胞膜，而原核细胞中只有核糖体一种细胞器，即大肠杆菌中没有内质网和高尔基体，不能对该蛋白质进一步修饰、纯化．
（3）在动物细胞培养的过程中，培养基的pH应该控制在7.2-7.4．从分子水平上使用抗原-抗体杂交对特异性免疫应答结果进行检测．
故答案为：
（1）B 转录
（2）内质网、高尔基体
（3）7.2-7.4    抗原-抗体杂交

点评 本题考查基因工程和细胞工程的有关知识，要求考生能够识记基因工程的工具酶；理解基因表达载体中启动子和终止子的功能；识记原核细胞和真核细胞结构的异同点，掌握与分泌蛋白形成有关的细胞器等，再结合所学知识准确答题．

练习册系列答案
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盐碱地中生活的某种植物，其细胞的液泡膜上有一种载体蛋白，能将细胞质基质中的Na＋逆浓度梯度运入液泡，降低Na＋对细胞质基质中酶的伤害。下列叙述错误的是（ ）

A．Na＋进入液泡与葡萄糖进入小肠上皮细胞的方式相同

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D．该载体蛋白作用的结果有助于提高植物的耐盐性
16．下列关于果酒和果醋制作的叙述，正确的是（　　）
A．制作果酒时瓶口需密闭，而制作果醋时中断通氧可能会引起醋酸菌死亡
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（1）图中所示的免疫过程为体液（细胞、体液）免疫．
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20．下丘脑与垂体组成一个完整的神经内分泌功能系统．下丘脑对垂体的控制有2种方式，如图所示（图中字母代表激素名称）．
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（4）激素存在着多种传送方式，其中一种方式是自身分泌的激素作用于自身叫自分泌，图中激素中存在自分泌的是D（填字母）．
10．人体内的细胞外液构成了细胞生活的液体环境，在这个环境中可发生许多生化反应，其中有（　　）
A．有机物彻底氧化分解
B．酶与激素的合成
C．神经递质与突触后膜受体结合
D．脂肪在消化道内水解为甘油和脂肪酸
17．利用酵母菌发酵制作果酒的流程，表示正确的是（　　）
A．挑选葡萄→榨汁→冲洗→酒精发酵→果酒
B．挑选葡萄→冲洗→榨汁→酒精发酵→果酒
C．挑选葡萄→冲洗→榨汁→醋酸发酵→果酒
D．挑选葡萄→榨汁→冲洗→酒精发酵→果醋
13．如图为人工合成的脂质双分子层示意图．下列物质中，可自由通过脂质双分子层的是（　　）
A．O2B．Na+C．葡萄糖D．氨基酸
5．为研究黄芪甲甙（黄芪的主要活性成分）延缓细胞衰老的机制，研究者用培养至不同代数的小鼠细胞进行了如下实验：
组别小鼠
细胞		实验处理
（8天）		SOD活性相对值丙二醇含量相对值P16基因mRNA量
1＜35代培养液12.84153.80.722
2＞50代培养液6.83210.50.804
3＞50代培养液+0.1%A液6.78211.20.808
4＞50代培养液+0.1%黄芪甲甙9.58161.60.768
注：0.1%黄芪甲甙由黄芪甲甙溶于DMSO中配制而成
（1）实验中设置第1组为整个实验提供了对照．第3组实验使用的A液为DMSO，设置该组实验的目的是作为对照排除DMSO对实验结果的干扰．
（2）已知SOD是细胞内能清除具有强氧化性自由基的酶，丙二醇是膜脂过氧化的产物．由实验结果可知，黄芪甲甙能（填“能”或“不能”）提高细胞内SOD活性，使细胞生物膜系统的丙二醇含量相对值降低而延缓了衰老．
（3）与年轻细胞相比，衰老细胞中P16基因的表达量较高．研究者用带有P16反义基因（能转录出与P16基因mRNA互补的RNA）的病毒感染小鼠细胞，可延缓细胞的衰老．表中实验结果还说明，黄芪甲甙能延缓细胞衰老的另一机制是黄芪甲甙能使P16基因表达水平降低而延缓细胞衰老．
（4）显微镜下观察各组细胞发现，与1、4组相比，2、3组细胞具有体积小、线粒体数量少、染色质聚集等结构特点．

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