Question

1．下列实验操作及目的，正确的是（　　）

• A． 将葡萄糖异构酶加入到冷却的海藻酸钠溶液中，以制备固定化酶
• B． 将新制得的固定化酵母凝胶珠用清水反复冲洗，以防止杂菌污染
• C． 向含DNA的2 mol•L^-1 NaCl溶液中快速加入蒸馏水，以迅速析出DNA
• D． 将切成小块的猕猴桃经液氮冷冻并研碎，以充分释放核物质

Answer 1

分析 1、酶和细胞的固定方法和特点

固定对象	酶	细胞
适宜固定法	交联法、吸附法	包埋法
特点	体积小，固定一种酶．
包埋法容易丢失	体积大，固定一系列酶．
难以化学结合和吸附
发挥作用需要的条件	适宜的温度、pH	适宜的温度、pH、
还需要营养物质和氧气

2、DNA粗提取和鉴定的原理：
（1）DNA的溶解性：DNA和蛋白质等其他成分在不同浓度NaCl溶液中溶解度不同；DNA不溶于酒精溶液，但细胞中的某些蛋白质溶于酒精；DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性．
（2）DNA的鉴定：在沸水浴的条件下，DNA遇二苯胺会被染成蓝色．
3、DNA粗提取和鉴定的过程：
（1）实验材料的选取：凡是含有DNA的生物材料都可以考虑，但是使用DNA含量相对较高的生物组织，成功的可能性更大．
（2）破碎细胞，获取含DNA的滤液：
动物细胞的破碎比较容易，以鸡血细胞为例，在鸡血细胞液中加入一定量的蒸馏水，同时用玻璃棒搅拌，过滤后收集滤液即可．如果实验材料是植物细胞，需要先用洗涤剂溶解细胞膜．例如，提取洋葱的DNA时，在切碎的洋葱中加入一定的洗涤剂和食盐，进行充分的搅拌和研磨，过滤后收集研磨液．
（3）去除滤液中的杂质：
方案一的原理是DNA在不同浓度NaCl溶液中溶解度不同；方案二的原理是蛋白酶分解蛋白质，不分解DNA；方案三的原理是蛋白质和DNA的变性温度不同．
方案二是利用蛋白酶分解杂质蛋白，从而使提取的DNA与蛋白质分开；方案三利用的是DNA和蛋白质对高温耐受性的不同，从而使蛋白质变性，与DNA分离．（4）DNA的析出与鉴定
①将处理后的溶液过滤，加入与滤液体积相等、冷却的酒精溶液，静置2～3min，溶液中会出现白色丝状物，这就是粗提取的DNA．用玻璃棒沿一个方向搅拌，卷起丝状物，并用滤纸吸取上面的水分．
②取两支20ml的试管，各加入物质的量浓度为2mol/L的NaCl溶液5ml，将丝状物放入其中一支试管中，用玻璃棒搅拌，使丝状物溶解．然后，向两支试管中各加入4ml的二苯胺试剂．混合均匀后，将试管置于沸水中加热5min，待试管冷却后，比较两支试管溶液颜色的变化，看看溶解有DNA的溶液是否变蓝．

解答 解：A、酶分子比较小，溶液从包埋材料中漏出，因此固定化酶一般不采用包埋法，A错误；
B、将新制得的固定化酵母凝胶珠用清水反复冲洗，以去除凝胶珠表面的氯化钙，B错误；
C、向含DNA的2 mol•L^-1 NaCl溶液中缓慢加入蒸馏水，慢慢析出DNA，C错误；
D、将切成小块的猕猴桃经液氮冷冻并研碎，以充分释放核物质，D正确．
故选：D．

点评 本题考查固定化酶、DNA的粗提取和鉴定，要求考生识记固定化技术；识记DNA粗提取的原理及操作过程，能结合所学的知识准确判断各选项．