Question

1．自生固氮菌可不与其它植物共生，能独立完成固氮作用，在农业生产中具有广泛的用途．研究人员从土壤中筛选高效的自生固氮菌株，并对其固氮能力进行了研究．
请回答下列问题：
（1）在配制含琼脂的培养基和倒平板的过程中，下列选项不需要的是② （填序号）
①酒精灯②接种环③高压蒸汽灭菌锅④棉塞
（2）要从土壤样品中分离出自生固氮菌，在获得土壤浸出悬液后，可以采用稀释涂布平板法将菌液涂布于缺氮培养基上进行筛选．以上操作过程中有三种材料或用具需要消毒或灭菌：①培养微生物用的培养基与培养皿；②操作者的双手；③玻棒、试管、烧瓶和吸管．其中需要灭菌的是①③．（填序号）
（3）在涂布平板时，滴加到培养基表面的菌液量不宜过多的原因是培养基表面的菌悬液会出现积液，导致菌体堆积，影响分离效果．
（4）涂布培养四天后，可通过观察菌落的形态特征来统计土壤中自身固氮菌的种类．
（5）为了进一步筛选高效固氮菌，研究人员将上述获得的等量的四种固氮菌分别接种到等量的液体培养基中进行振荡培养相同时间后，对固氮菌进行计数并测定培养液中的含氮量，结果如表：

	甲菌	乙菌	丙菌	丁菌
菌量（个/mL）	2.1×105	2.5×105	1.8×105	2.0×105
含氮量（K）	3.32	4.38	5.34	5.32

①培养过程中需不断振荡的目的是让固氮菌与培养液充分接触．
②若想对固氮菌进行计数，可采用的接种方法是稀释涂布平板法，统计的菌落数往往比活菌的实际数目少．
③由上述结果可知，丙菌的固氮效率最高．

Answer 1

分析 1、细菌菌落特征：菌落较小，形状表面或光滑黏稠，或粗糙干燥，易挑起，多为白色；而真菌落特征：菌落较大、菌丝细长，菌落疏松，呈绒毛状、蜘蛛网状、棉絮状，无固定大小，多有光泽，不易挑，有时还呈现红色、褐色、绿色、黑色、黄色等不同的颜色（孢子的颜色）．
2、自生固氮菌是指在土壤中能够独立进行固氮的细菌，可以利用氮气作为氮源，所以培养基中不需要加氮源．

解答 解：（1）平板培养基配制的基本流程为：：计算→称量→溶化（包括琼脂）→调节PH→分装→灭菌→倒平板→（冷却后）倒置平板，不需要接种环接种．故选：②．
（2）对微生物进行分离和计数，应该用稀释涂布平板法．自生固氮菌是指在土壤中能够独立进行固氮的细菌，所以培养基中不需要加氮源．①培养微生物用的培养基与培养皿需要进行灭菌处理；②操作者的双手需要用酒精消毒；③玻棒、试管、烧瓶和吸管需要灭菌处理．
（3）由于培养基表面的菌悬液会出现积液，导致菌体堆积，影响分离效果，因此在涂布平板时，滴加到培养基表面的菌液量不宜过多．
（4）用肉眼来观察并鉴定细菌的依据是菌落的形态、大小和颜色．因此可通过应用固体培养基，观察菌落形态的形态特征来统计土壤中自身固氮菌的种类．
（5）①为了让固氮菌与培养液充分接触，在培养过程中需不断振荡．
②若想对固氮菌进行计数，可采用的接种方法是稀释涂布平板法，由于一个菌落可能是由两个或多个细菌长成，因此统计的菌落数往往比活菌的实际数目 少．
③由上述结果可知，丙菌数量最少，但固氮量最多，因此可判断出丙菌的固氮效率最高．
故答案为：
（1）②
（2）缺氮      ①③
（3）培养基表面的菌悬液会出现积液，导致菌体堆积，影响分离效果
（4）菌落
（5）①让固氮菌与培养液充分接触　②稀释涂布平板法    少　③丙

点评 本题考查结合表格数据，考查微生物分离和培养，要求考生识记培养基的成分、种类及作用；识记接种微生物常用的两种方法，能结合表中数据准确答题，属于考纲识记和理解层次的考查．