Question

2．回答下列有关遗传信息传递与表达的问题．
为制备目的基因Y（图1）与质粒X（图2）的重组DNA，将质粒X与含Y的DNA片段加入含有限制性核酸内切酶BgⅠⅡ与BamHⅠ的反应混合物中，酶切后的片段再加入含有连接酶的反应体系中．其中，质粒X含有leu2基因，可用于合成亮氨酸，目的基因Y含有卡那霉素抗性基因KanR

（1）根据图3分别写出BgⅠⅡ与BamHⅠ酶切后形成的末端序列：、．
（2）BgⅠⅡ酶切后的质粒与BamHⅠ酶切后的目的基因Y能够连接的原因是酶切后产生相同的黏性末端，并遵循碱基互补配对原则．
将连接后的产物转化入一种Z细菌，Z细菌对卡那霉素敏感，且不能在缺乏亮氨酸的培养基中培养．
（3）使用BgⅠⅡ处理重组质粒，可以得到A．
A．长度为3300bp的环状DNA
B．长度为3300bp的线形DNA
C．长度为2800bp和500bp的线形DNA
D．长度为2800bp的环状DNA
（4）要筛选含有重组质粒的Z细胞，应选择C．
A．卡那霉素和亮氨酸均含的培养基
B．卡那霉素和亮氨酸均不含的培养基
C．含卡那霉素但不含亮氨酸的培养基
D．含亮氨酸但不含卡那霉素的培养基．

Answer 1

分析 基因工程技术的基本步骤：
（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成．
（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等．
（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样．将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法．
（4）目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术．个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等．

解答 解：（1）限制酶BgⅠⅡ与BamHⅠ的识别序列及切割位点如图：，因此它们切割形成的末端序列依次为：、．
（2）BgⅠⅡ酶切后的质粒与BamHⅠ酶切后的目的基因Y具有相同的黏性末端，根据碱基互补配对原则，它们能够连接形成重组DNA．
（3）BgⅠⅡ酶切后的质粒与BamHⅠ酶切后的目的基因形成的重组DNA分子上没有BgⅠⅡ酶的识别序列，因此使用BgⅠⅡ处理重组质粒，可以得到长度为3300bp的环状DNA．
（4）由于质粒X含有leu2基因，可用于合成亮氨酸，目的基因Y含有卡那霉素抗性基因KanR，因此要筛选含有重组质粒的Z细胞，应选择含卡那霉素但不含亮氨酸的培养基．
故答案为：
（1）    
（2）酶切后产生相同的黏性末端，并遵循碱基互补配对原则
（3）A
（4）C

点评 本题考查基因工程的相关知识，要求考生识记基因工程的原理、操作步骤，掌握各操作步骤中需要注意的细节，能结合图中及题中信息准确答题．