Question

【题目】Ⅰ土壤有“微生物的天然培养基”之称，下图表示对土壤中某种微生物进行分离和计数而进行的对样品的稀释和稀释液的取样培养流程示意图。请据图回答有关问题。

（1）图示统计样品活菌数目的方法叫做_______________法，主要包括__________操作和____________操作。

（2）当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的_____________，一般选择菌落数在_______________的平板进行计数。

（3）图中选择了104、105、106倍的稀释液进行平板培养，最可能是测定土壤中_____________（填“细菌”或“放线菌”或“真菌”）的数量，这个平板需要在30～37℃温度下、PH调至______培养1-2d。Ⅱ.以下是胡萝卜素的粗提取和鉴定实验

（1）请完成用萃取法提取胡萝卜素的实验流程：胡萝卜→粉碎→干燥→萃取→过滤→_______→胡萝卜素。

（2）胡萝卜素的纸层析标准结果示意图，图中A、B、C、D四点中，属于标准样品的样点是_______________，图中②表示________________。

Answer 1

【答案】稀释涂布平板 系列（梯度）稀释 涂布平板 一个活菌 30～300 细菌 中性或微碱性 浓缩 A、D 其它色素或杂质

【解析】

1、活菌计数最常用的是稀释涂布平板计数法，最关键的步骤是梯度稀释和涂布平板，为了保证结果准确，一般选择菌落数在30~300之间的平板进行计数。由于在土壤中不同微生物的数量的不同，因此培养不同的微生物进对土壤样液的稀释倍数也不同，测定细菌的数量，一般选择104、105和106的倍稀释液进行平板培养，测定放线菌的数量，一般选择103、104和105的倍稀释液进行平板培养，测定真菌的数量，一般选择102、103和104的倍稀释液进行平板培养。

2、胡萝卜素是橘黄色结晶，化学性质比较稳定，不溶于水，微溶于乙醇，易溶于石油醚等有机溶剂。

3、提取天然胡萝卜素的方法主要有：一是从植物中提取；二是从大面积养殖的岩藻中荻得；三是利用微生物的发酵生产。

4、最适宜作胡萝卜素萃取剂的是石油醚。

5、实验流程为：胡萝卜→粉碎→干燥→萃取（石油醚）→过滤_→浓缩→胡萝卜素→鉴定（纸层析法）。

6、对提取的胡萝卜素粗品鉴定采用的是纸层析法，其原理是色素在滤纸上扩散速度不同，从而使各成分分开。因层析液易挥发，故应在上方用玻璃盖盖严，以防止层析液挥发。在进行点样时，应注意点样应该快速细致并保持滤纸干燥。层析液不能没及滤液基线，否则点样处的有机成分会溶解在层析液中。

Ⅰ.（1）图示统计样品活菌数目的方法叫做稀释涂布平板法，主要包括系列（梯度）稀释操作和涂布平板操作。

（2）当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌，一般选择菌落数在30～300 的平板进行计数。

（3）图中选择了104、105、106倍的稀释液进行平板培养，最可能是测定土壤中细菌的数量，这个平板需要在30～37℃温度下、pH调至中性或微碱性培养1-2d。

Ⅱ. （1）用萃取法提取胡萝卜素的实验流程：胡萝卜→粉碎→干燥→萃取→过滤→浓缩→胡萝卜素。

（2）胡萝卜素的纸层析标准结果示意图，图中A、B、C、D四点中，属于标准样品的样点是A、D ，图中②表示其它色素或杂质。