为扩大可耕地面积.增加粮食产量.沿海滩涂盐碱地的开发利用备受关注．我国科学家应用耐盐碱基因培育出了耐盐碱水稻新品系．请据图回答下列问题:表2:几种限制酶识别序列及切割位点表限制酶Ala IEcoRIPstISmaI切割位点 (1)获取真核生物的基因通常采用人工合成法.通过图示中①方法合成的耐盐碱基因中是不含的.如果要将耐盐碱基因和质粒重组.应� 题目和参考答案——青夏教育精英家教网—

题目内容

为扩大可耕地面积，增加粮食产量，沿海滩涂盐碱地的开发利用备受关注．我国科学家应用耐盐碱基因培育出了耐盐碱水稻新品系．请据图回答下列问题：

表2：几种限制酶识别序列及切割位点表

限制酶	Ala I	EcoRI	PstI	SmaI
切割位点

（1）获取真核生物的基因通常采用人工合成法，通过图示中①方法合成的耐盐碱基因中是不含

的，如果要将耐盐碱基因和质粒重组，应该在基因两侧的A和B位置除了接上以上两个结构外还需分别加入

限制酶识别序列，这样设计的优点有利于质粒和目的基因定向连接．
（2）过程②采用PCR技术扩增目的基因时，在PCR反应体系需加入引物Ⅰ和引物Ⅱ等物质，若目的基因扩增4代，则共用了引物Ⅰ

个．
（3）请画出PstⅠ切割DNA形成黏性末端的过程：

．
（4）图示中将基因表达载体构建完成后没有直接导入农杆菌，而是先将其导入大肠杆菌，目的是

．
（5）在步骤⑤⑥过程中都需用

处理两类细菌．为了确认目的基因通过⑦过程导入植物细胞中后是否成功表达，通常从分子水平进行检测的方法是用

法．
（6）假设该抗盐碱基因D，通过基因工程导入水稻后连接到水稻的一条染色体上，则该水稻进行减数分裂的细胞在联会时有

个D基因．

考点：基因工程的原理及技术

专题：

分析：分析题图：图示表示应用耐盐碱基因培育出了耐盐碱水稻新品系的过程，其中①表示以mRNA为模板逆转录形成DNA；②表示采用PCR技术扩增目的基因；③表示用限制酶切割运载体；④表示基因表达载体的构建过程；⑤表示将目的基因导入大肠杆菌，使其大量繁殖；⑥⑦表示采用农杆菌转化法将目的基因导入受体细胞．

解答： 解：（1）①表示采用逆转录法人工合成目的基因（耐盐碱基因），而人工合成的目的基因不含启动子和终止子；切割运载体时采用的是限制酶EcoRⅠ、SmaⅠ，为了便于目的基因与运载体定向连接形成重组DNA，还应在基因两侧的A和B位置接上限制酶EcoRⅠ、SmaⅠ的识别序列．
（2）目的基因扩增4代后共得到16个DNA分子，除了含有模板DNA链的1个DNA分子外，其余的DNA分子都含有引物I，因此共用了引物Ⅰ15个．
（3）限制酶PstⅠ的识别和切割序列为

，因此用该酶切割DNA形成黏性末端的过程为：

．
（4）图示中将基因表达载体构建完成后没有直接导入农杆菌，而是先将其导入大肠杆菌，目的是获取大量重组质粒（让目的基因扩增）．
（5）将目的导入微生物细胞时，需要用Ca²⁺处理微生物细胞，使其成为易于吸收周围环境中DNA的感受态．因此步骤⑤⑥过程中都需用Ca²⁺处理两类细菌．从分子水平检测目的基因是否表达，采用抗原-抗体杂交法．
（6）假设该抗盐碱基因D，通过基因工程导入水稻后连接到水稻的一条染色体上，则该水稻的基因型可表示为Dd，在减数第一次分裂间期细胞中进行了DNA复制，因此联会时细胞中有2个D基因．
故答案为：
（1）启动子和终止子　EcoRⅠ、SmaⅠ
（2）15
（3）

（4）获取大量重组质粒（让目的基因扩增）
（5）Ca²⁺　抗原-抗体杂交
（6）2

点评：本题结合耐盐碱水稻新品系的培育过程图解，考查基因工程的相关知识，要求考生识记基因工程的原理及操作步骤，能准确判断图中各过程的含义，再结合图中信息准确答题．